Foxp3/轉(zhuǎn)錄因子染色固定破膜試劑盒的操作方法

來源：北京信至利達(dá)商貿(mào)有限公司 2022年09月27日 18:24

Foxp3/轉(zhuǎn)錄因子染色固定破膜試劑盒是一款經(jīng)過優(yōu)化的專門針對轉(zhuǎn)錄因子、核蛋白（例如Foxp3和STAT3）以及細(xì)胞因子和趨化因子等流式抗體進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)抗原染色時(shí)所用的固定、破膜試劑。

操作方法：

1.取100μL細(xì)胞/管（約1×106個(gè)細(xì)胞）于流式管內(nèi)。

2.[可選步驟] 根據(jù)說明書進(jìn)行Fixable Viability Dye（死活細(xì)胞鑒定染料）染色。

3.按照抗體說明書加熒光標(biāo)記抗體染細(xì)胞表面Marker。

4.孵育完成后加入1mL細(xì)胞染色緩沖液，300g離心5min，棄上清，再加入100uL細(xì)胞染色緩沖液重懸細(xì)胞。

5.加入1mL 1× Fixation Working Solution，渦旋混勻，4℃反應(yīng)30min，反應(yīng)完后，600g離心5min，棄上清。

6.加入2mL 1× Permeabilization Working Solution，渦旋混勻，600g離心5min，棄上清。

7.重復(fù)步驟6。

8.加入100μL 1×Permeabilization Working Solution重懸細(xì)胞。

9.[可選步驟] 加2µL 2％正常小鼠/大鼠血清于細(xì)胞懸液中封閉Fc受體，室溫下孵育15min。

10.按照抗體使用說明書加熒光標(biāo)記的核染色抗體，混勻后室溫避光孵育30min。

11.加入2mL 1×Permeabilization Working Solution，600g離心5min，棄上清。

12.加入適量細(xì)胞染色緩沖液重懸細(xì)胞，即可上機(jī)檢測。

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