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細(xì)胞凋亡是程序性細(xì)胞死亡的嚴(yán)格調(diào)控形式，可觸發(fā)細(xì)胞自我毀滅而不受任何外部影響。細(xì)胞凋亡是生命的重要組成部分，特別是對于必須控制細(xì)胞的生長、發(fā)育和更新以維持體內(nèi)平衡的多細(xì)胞生物而言。檢測細(xì)胞凋亡的方法有很多，根據(jù)凋亡細(xì)胞形態(tài)特征，利用光學(xué)顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡和透射電子顯微鏡等來觀察細(xì)胞；也可以根據(jù)細(xì)胞凋亡過程中的時(shí)相變化檢測是否發(fā)生凋亡，常見的有Caspase活性檢測、Annexin V檢測、線粒體膜電位檢測、TUNEL檢測等。
陶術(shù)生物能夠?yàn)閺V大科研工作者提供細(xì)胞凋亡檢測服務(wù)。我們提供的細(xì)胞凋亡檢測以Annexin V-FITC/PI雙染法為主。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合，因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V進(jìn)行熒光素(EGFP、FITC)標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。所以，通過Annexin V和PI雙染的方法，就可以把早期凋亡的細(xì)胞與晚期凋亡加壞死的細(xì)胞區(qū)分開來。
實(shí)驗(yàn)流程
1、細(xì)胞培養(yǎng)：取對數(shù)生長期的細(xì)胞，按照合適鋪板密度鋪細(xì)胞；
2、化合物處理：合適濃度化合物孵育細(xì)胞；
3、細(xì)胞染色：Annexin-V和溴化乙錠(PI)避光孵育；
4、流式分析：流式細(xì)胞儀檢測。
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