大鼠腸靜脈組織提取物胞實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

人臍動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基

人臍靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基

人臍動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基

人大隱靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基

人冠狀動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基

人腹膜毛細血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基

人髂動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基

人血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基

人大隱靜脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基

人脈絡膜血管細胞*培養(yǎng)基

人顱蓋造骨細胞*培養(yǎng)基

人滑膜細胞*培養(yǎng)基

人骨骼肌細胞*培養(yǎng)基

人關節(jié)軟骨細胞*培養(yǎng)基

人椎間盤髓核細胞*培養(yǎng)基

人真皮微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基

人真皮淋巴上皮細胞*培養(yǎng)基

胎兒表皮角化細胞*培養(yǎng)基

新生兒表皮角化細胞*培養(yǎng)基

成人表皮角化細胞*培養(yǎng)基

胎兒真皮成纖維細胞*培養(yǎng)基

成人真皮成纖維細胞*培養(yǎng)基

人皮下脂肪細胞*培養(yǎng)基

人內(nèi)臟脂肪細胞*培養(yǎng)基

人軟骨細胞*培養(yǎng)基