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單細胞培養(yǎng)真是一件特別心累的事，不知不覺間可能就會出現(xiàn)很多問題，細胞不長了、不貼壁了......實在讓人操碎了心。今天，美國Namocell公司就對單細胞培養(yǎng)過程中常見的異常進行分析。
一、培養(yǎng)細胞不貼壁
可能原因：
①胰蛋白酶消化過度；②支原體污染；③培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；④細胞老化；⑤接種細胞起始濃度太低或太高。
解決方法：
①縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；②分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；③使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；④啟用新的保種細胞；⑤調(diào)節(jié)接種細胞濃度。
二、懸浮細胞成簇
可能原因：
①培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子；②支原體污染；③蛋白酶過度消化使得細胞裂解；④DNA污染。
解決方法：
①用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸；②細胞獲得單細胞懸液；③分離培養(yǎng)物，檢測支原體；④DNasel處理細胞。
三、細胞生長不好
可能原因：
細胞本身的狀態(tài)
①細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；②細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；③細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；④胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未*分離而成團，細胞死亡；⑤細胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速溶。
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