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在自然界中，固氮微生物可以在固氮酶的作用下，通過生物固氮(以自生固氮、共生固氮或聯(lián)合固氮的形式)將大氣中的分子氮轉(zhuǎn)化為氨，參與氮循環(huán)。研究固氮微生物不僅有利于氮肥的合理施用，而且有利于微生物肥料的發(fā)展。固氮酶檢測(cè)能夠直接反映固氮微生物的固氮能力。
生物固氮是固氮微生物*的生理功能，由固氮酶催化。固氮酶活性的檢測(cè)對(duì)于生物固氮工程的研究具有重要意義。以乙炔還原法為基礎(chǔ)，為研究人員提供了固氮酶活性、海藻固氮菌、土壤固氮酶活性和固氮酶檢測(cè)。
取適量樣品于帶有異丁基橡膠塞的密封瓶中，抽出部分空氣，注入等量的標(biāo)準(zhǔn)乙炔氣體，調(diào)節(jié)光照時(shí)間和溫度進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)后取密封瓶中的氣體進(jìn)行檢測(cè)。乙烯含量用外標(biāo)法定量，配置5種不同濃度的乙烯氣體進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)濃度和峰面積建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，每批樣品都要重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。方法采用標(biāo)準(zhǔn)樣品法進(jìn)行質(zhì)量控制。每10個(gè)樣品用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)乙烯氣體樣品進(jìn)行測(cè)試，同一樣品平行測(cè)試5次，計(jì)算準(zhǔn)確度和精密度，準(zhǔn)確度和精密度應(yīng)在20%以內(nèi)。
1、檢測(cè)原理:乙炔還原法(固氮酶能將乙炔氣還原成乙烯氣)
2、測(cè)試平臺(tái):氣相色譜儀-氫火焰離子檢測(cè)器(GC-FID)
樣品要求:
1、土樣(≥8.0g/樣；如果待測(cè)含水量≥10.0g/個(gè)樣品)，用干冰或冰袋運(yùn)輸。
2、根瘤樣品(≥1.0g/樣品)在液氮中冷凍，在-80℃下儲(chǔ)存，在干冰中運(yùn)輸。
3、細(xì)菌(≥15ml/樣品)，無氮培養(yǎng)基活化，冰袋運(yùn)輸。
固氮酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方案:
1、稱取約1.0g結(jié)節(jié)組織，放入20mL空瓶中。用注射器抽取2ml空氣后，用注射器注入2ml乙炔氣體。樣品中乙炔的濃度為10%。
2、將瓶子放在30℃的恒溫水浴中60分鐘，避光。
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