石蠟包埋樣本是一個可靠的分子生物學研究的材料來源。在石蠟切片上進行原位雜交或原位PCR分析的分子生物學方法,是免疫細胞化學技術的重要延伸。通過對DNA或mRNA分析亦可直接證實或補充免疫細胞化學的發現。成功地從蠟塊中提取出高質量的DNA,*可以滿足某些腫瘤分子生物學研究的需要,結束了DNA研究依賴于新鮮或冰凍組織和細胞的歷史,而且可以廣泛地應用于大宗病例的回顧性研究,對腫瘤發生的分子機制的探討,診斷與鑒別診斷研究和患者預后評估等方面均具有重要價值。
FFPERNA石蠟包埋樣本制片操作程序如下:
(一)材料的采集與分割
采集材料應根據制片的目的和要求而定,材料要有代表性,無病蟲害或其它損傷,如要觀察病理解剖,則要取病斑、病癥部位。采下的材料應立即放在標本箱或濕布包起來帶回實驗室進行分割固定(如有條件也可在試驗地采集后進行分割固定)。為使固定液能迅速的滲透材料,材料要進行分割。分割時動作要迅速,以防材料萎蔫。分割塊的大小,宜小不宜大,一般不超過1cm3,分割后立即殺死固定。
(二)殺死與固定
利用藥劑迅速把細胞殺死,以保持材料本來的狀態和結構。常用的固定有A.A固定液、卡諾固定液等。將固定液放在具塞小瓶中,投入材料,蓋好瓶蓋。用FA.A固定液固定,時間至少24小時。F.A.A固定液既是良好的固定劑,也是保存劑,因此材料可長期保存在固定液中備用。卡諾固定液穿透力強,固定較小材料一般1~6小時即可,不超過24小時。因卡諾固定液不能做保存劑,所以固定后要用95%、85%酒精浸洗,每級約20min.,然后保存在70%的酒精中備用。
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