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冷凍干燥機如何對菌種進行保藏

來源:江蘇恒敏儀器制造有限公司   2022年11月01日 10:37  

 

 

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江蘇恒敏儀器冷凍干燥機主要部件分為干燥箱、凝結(jié)器、冷凍機組、真空泵、加熱/冷卻裝置等。凍干機起源于19世紀20年代的真空冷凍干燥技術(shù),后真空凍干技術(shù)除了在醫(yī)藥上有著廣泛應(yīng)用,在生物制品、食品、血液制品、活性物質(zhì)領(lǐng)域之外的領(lǐng)域也發(fā)揮了重要作用。下面小編為大家介紹下微生物菌種的冷凍干燥保藏操作流程:
 凍干機適用于大多數(shù)細菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏,但不適于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲等。其操作流程如下:
 1、安瓿管準備
 安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時,先用2%鹽酸浸泡過夜,自來水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標簽,標上菌號及時間,加入脫脂棉塞后,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。
 2、保護劑的選擇和準備
 保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護劑時,應(yīng)注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鐘,備用。
 3、凍干樣品的準備
 在適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,進行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術(shù)規(guī)程》(試行)),與保護劑混合均勻,分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長的毛細滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物,應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻,再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短,在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預凍。分裝時應(yīng)注意在無菌條件下操作。
 4、預凍
 一般預凍2小時以上,溫度達到-20℃到-35℃左右。
 5、冷凍干燥
 采用凍干機進行冷凍干燥。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi),開始冷凍干燥,時間一般為8-20小時。
 終止干燥時間應(yīng)根據(jù)下列情況判斷:
 安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀;
 真空度接近空載時的最高值;
 樣品溫度與管外溫度接近;
 選用1-2支對照管,其水份與菌懸液同量,視為干燥完結(jié);
 選用一個安瓿管,裝1-2%氯化鈷,如變深蘭色,可視為干燥完結(jié);
 冷凍干燥完畢后,取出樣品安瓿管置于干燥器內(nèi),備用。
 6、真空封口及真空檢驗
 將安瓿管頸部用強火焰拉細,然后采用真空泵抽真空,在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。
 7、保藏
 安瓿管應(yīng)低溫避光保藏。
 8、質(zhì)量檢查
 冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查,如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。

 

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