一、溶解
1. 離心
收到的管子內為凍干粉,開蓋前要快速離心10000-12000rpm x 30s。
2. 溶解
選擇合適的溶解液,溶解到后邊的濃度范圍內。如此可以確保蛋白充分溶解復性,保證產品質量,請不要使用非建議溶液溶解。
目的是使細胞因子從無活性的凍干粉狀態充分溶解復性成為有活性的蛋白溶液。
注意:不要用渦旋振蕩儀劇烈渦旋,可以用槍頭輕輕吹打幾次助溶。有的細胞因子溶解比較慢,需要在室溫靜置或者搖床低速搖一段時間使充分溶解。
3.短期儲存
溶解后的蛋白溶液可以在2-8度儲存1周。
4.長期儲存
如果您的實驗,一周內不能用完。必須將第2步中獲得的溶液用含載體蛋白的溶液進一步稀釋。(詳見:三、稀釋)
目的是對溶解一步的蛋白溶液進行稀釋凍存。加入載體蛋白可以封閉掉管壁上的蛋白結合位點,且可以在低溫下維持細胞因子的穩定。
三、稀釋
1. 配制
配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖備用(確保無菌),這三種稀釋液的配制的Buffer可以用PBS或者細胞基礎培養基。使用以上三種稀釋液的任意一種稀釋重懸的蛋白溶液,稀釋濃度根據您的使用濃度確定,不要低于10ug/ml。即可分裝成小管,凍存在-20--80度。
2.使用方法
使用時取用一支凍存的細胞因子,加入到您的培養基中至使用濃度。細胞因子應避免反復凍融。
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