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分享一下熒光PCR檢測(cè)試劑盒具體的操作流程
熒光PCR檢測(cè)試劑盒采用熒光PCR技術(shù)，通過(guò)熒光信號(hào)的變化檢測(cè)犬線粒體基因的特異性序列。該試劑盒適用于鑒定多種樣本中是否含有犬源性基因成份。作用原理：所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
熒光PCR檢測(cè)試劑盒具體的操作流程：
1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本手冊(cè)的要求在試劑制備區(qū)、樣品處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行。各區(qū)域的實(shí)驗(yàn)服、儀器和耗材應(yīng)單獨(dú)使用，不得混用；實(shí)驗(yàn)中采用了帶濾芯的吸頭；樣品處理區(qū)應(yīng)配備生物安全柜，在其中進(jìn)行樣品處理；三個(gè)區(qū)域應(yīng)配備紫外線消毒裝置。
2.為避免RNA降解，樣品處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃下進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢測(cè)；樣品處理中使用的儀器和耗材應(yīng)在不含核酶的情況下進(jìn)行處理。
3.應(yīng)為每個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒中的所有試劑在使用前應(yīng)在室溫下充分熔化和混合，并應(yīng)立即離心。
5.試劑盒中的所有陰性和陽(yáng)性對(duì)照品應(yīng)轉(zhuǎn)移到樣品制備區(qū)，并在使用前單獨(dú)儲(chǔ)存。
6.為了防止熒光干擾，必須避免徒手直接接觸PCR反應(yīng)管，并避免PCR反應(yīng)管上的任何標(biāo)記。
7.儀表放大的相關(guān)參數(shù)應(yīng)根據(jù)本手冊(cè)的相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)的試劑不能混合。
8.在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，產(chǎn)品廢棄物應(yīng)在丟棄前進(jìn)行無(wú)害化處理。
熒光PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法的局限性有什么？
1、樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
2、樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；
3、陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；
4、病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
5、不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
6、試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；
7、本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
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