小刀最近在準(zhǔn)備11.3下午的講座（名稱(chēng)：siRNA實(shí)驗(yàn)操作小技巧），這不整理不知道，一整理嚇一跳。那句話(huà)怎么說(shuō)來(lái)著？越是看習(xí)慣了的東西，便越是習(xí)焉不察，美丑都難看出。

你別看siRNA的身材小，其中蘊(yùn)含的奧秘可一點(diǎn)也不少。那么，我們就一起走進(jìn)siRNA，深度探討19bp微觀世界里的那些事兒。

我們知道脫靶效應(yīng)自2003年發(fā)表以來(lái)，一直是限制siRNA特異性的關(guān)鍵因素，影響其在功能基因組學(xué)和疾病治療領(lǐng)域的應(yīng)用。因此，如何使siRNA在保持特異性的同時(shí)減少脫靶效應(yīng)，是各大廠(chǎng)商共同努力的目標(biāo)。Dharmacon siRNA創(chuàng)新性的疊加3種技術(shù)——SMARTselection™技術(shù)、SMARTpool®技術(shù)、ON-TARGETplus™雙鏈修飾技術(shù)，全方面提升siRNA的表現(xiàn)性能，同時(shí)保證防脫靶效率>90%。

SMARTselection™特殊設(shè)計(jì)算法
1. 種子域頻率分析：調(diào)整反義鏈種子域序列排布，生成低頻種子域siRNA，從而減少miRNA-like脫靶效應(yīng)

圖1 siRNA序列在第1位、第8-19位堿基保持一致，僅改變第2-7位種子域序列

2. SMARTselection™篩選器：針對(duì)一個(gè)基因設(shè)計(jì)多對(duì)不同的siRNA，將驗(yàn)證得到的效果很優(yōu)的4對(duì)siRNA投放到產(chǎn)品中，確保siRNA的功能性和特異性

圖2 同一基因的4對(duì)siRNA靶向不同作用位點(diǎn)

創(chuàng)新性SMARTpool® 技術(shù)
1. 將4對(duì)siRNA等比例mix形成pool，有效降低單對(duì)siRNA引起的脫靶效應(yīng)

2. 確保高水平的靶向基因沉默效率：保證每個(gè)基因提供的4對(duì)siRNA中至少有3對(duì)有≥75%的靶基因沉默效率

圖3 SMARTpool能有效減少單對(duì)siRNA引起的脫靶效因，同時(shí)保持高水平的靶向基因沉默

ON-TARGETplus™雙鏈修飾技術(shù)
1. 全方面減少脫靶效應(yīng)：
1） 正義鏈第1、2堿基處進(jìn)行化學(xué)修飾，有效防止正義鏈進(jìn)入RISC，降低正義鏈引起的脫靶效應(yīng)
2） 反義鏈第2堿基處進(jìn)行化學(xué)修飾，提高反義鏈判別能力，大程度減少反義鏈脫靶

圖4 脫靶效應(yīng)主要由反義鏈種子域活動(dòng)引起，單獨(dú)修飾正義鏈無(wú)法減少脫靶效應(yīng)，雙鏈修飾可大程度減少脫靶效應(yīng)

2. 保證很優(yōu)的靶向基因沉默效率：有效抑制miRNA-like作用，大幅提高siRNA的靶向敲低作用

圖5 雙鏈修飾抑制正義鏈活動(dòng)，提高反義鏈判別能力

3. 抑制假陽(yáng)性顯型出現(xiàn)：有些siRNA會(huì)在短期實(shí)驗(yàn)中引起細(xì)胞生長(zhǎng)抑制，從而影響靶向基因沉默效率，ON-TARGETplus™修飾能夠有效減少生長(zhǎng)抑制，同時(shí)保證靶向基因沉默效果

圖6 在乳腺癌細(xì)胞系中研究沉默ARPC1B基因?qū)?xì)胞遷移的影響：均一地刮取單層細(xì)胞，評(píng)估細(xì)胞遷移愈合刮口的速度，未修飾的siRNA假陽(yáng)性顯型明顯，而ON-TARGETplus™修飾能夠有效抑制該現(xiàn)象

綜上，Dharmacon siRNA可提供人、小鼠、大鼠全基因組范圍內(nèi)的預(yù)制siRNA，搭配SMARTselection™、SMARTpool®、ON-TARGETplus™三大技術(shù)，為大家?guī)?lái)更好的siRNA用戶(hù)體驗(yàn)。

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