手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
磷酸化蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動物組織中提取磷酸化蛋白。磷酸化蛋白提取試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
操作方法：
1、組織總蛋白的提取
(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的***酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF混勻，放置在冰上備用;
(2)稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作;
(3)將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 ℃ 12000g 離心30min;
(4)吸取上清至新的管中;
(5)進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實驗。
2、細(xì)胞總蛋白的提取
(1)裂解液的用量:107個細(xì)胞需要裂解液1ml;
(2)貼壁細(xì)胞:棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS 洗兩次，棄去PBS，然后加入計算好的細(xì)胞裂解液;在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min;
(3)懸浮細(xì)胞:4℃ 400g 離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次;
(4)裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4℃12000g離心30min;
(5)將上清移入新的EP管中;進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實驗。
(提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時間儲存。)
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心