科研試驗中要使ELISA試劑盒測定得到精確的成果，不論是定性的仍是定量的，必須嚴厲按照規則的方法制備試劑和施行測定。一般性試劑，如包被緩沖液、洗刷液、標本稀釋液、結合物稀釋液、底物工作液和酶反響終止液等，制造時不可漫不經心。

(一)加樣 

在ELISA試劑盒中除了包被外，一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調加樣量的精確性，例如規則為加樣一滴。此時應該運用相同口徑的滴管，保持精確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應力求精確。標本和結合物的稀釋液應按規則制造。加樣時應將液體加在孔底，防止加在孔壁上部，并注意不可出現氣泡。

(二)保溫 

在ELISA試劑盒中一般有二次抗原抗體反響，即加標本后和加結合物后，此時反響的溫度和時刻應按規則的要求，保溫容器是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應疊在一起。為防止蒸騰，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕紗布的濕盒中。濕盒應該是金屬的，傳熱簡單。如用保溫箱，空濕盒應預先放在其間，以平衡溫度，這在室溫較低時更為重要。參加底物后，反響的時刻和溫度通常不做嚴厲要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在試驗臺上，以便不時調查，待對看管顯色適其時，即可終止酶反響

(三)洗刷 

洗刷在ELISA試劑盒進程中不是反響聚，但卻是決定試驗成敗的關鍵。洗刷的意圖是洗去反響液中沒有與固相抗原或抗體結合的物質以及在反響進程中非特異性吸附于固相載體的攪擾物質。因此在ELISA試劑盒測定的反響進程中應盡量防止非特異性吸附，而在洗刷時又應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。在標本和結合物的稀釋液和洗刷液中參加聚山梨酯一類物質即右達到此意圖。

ELISA板的洗刷一般可采用以下方法：

①吸干孔內反響液;

②將洗刷液注滿板孔;

③放置2min，略作搖擺;

④吸干孔內液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗刷的次數一般為3～4次，有時乃至需洗5～6次。

(四)比色 

如陰性對照色彩極淺，在定性測定中一般可采用目視比色。如用比色計測定成果，精確性決定于ELISA板底的平整與透明度和比色計的質量。