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除去血中干擾物質的前處理方法

來源:科德角國際生物醫學科技(北京)有限公司   2022年12月05日 15:36  

一般來說由于血液的組成比較復雜,其中的許多物質尤其是高等動物的血漿或血清對TALLAL試劑與內毒素反應很強的干擾作用。因此當我們對這類樣品的內毒素進行測定時必須將其中的干擾物質除去后方可進行檢測。

 

目前作為血漿中的干擾物質主要有各種蛋白酶抑制劑、內毒素結合蛋白以及纖溶酶原抑制劑等物質,對于比色法由于Xa因子能分解 Boc-LEU-Gly-Arg-PNA 肽鏈。因此在測定前排除這些干擾物是十分必要的。

除去血中干擾物質的前處理方法主要有以下幾種,現分別介紹如下

 

1稀釋加熱法血漿用溶解水進行3~10倍稀釋然后在37 ~ 100℃水中進行加熱處理。保溫時間一般在5~10分鐘

2氯仿提取法血漿加等量的氯仿振動3小時然后取上層進行檢測

3)乙-醚處理法血漿加入乙-醚處理并在40℃保溫將乙-醚去除

4三氟代乙酸法血漿中加入乙酸調節pH4.0后用K2HPO4調節pH7~7.5

5表面活性劑處理法同稀釋加熱法一樣只是將稀釋用水改為表面活性劑

6凝膠過濾法

7堿性處理法血漿用0.2NNaOH37℃保溫10分鐘后用HCl中和

8高氯酸法PCA或新高氯酸法New PCA);

9Beads將吸附內毒素的特殊樹脂放入血漿中,取出后加入LAL試劑進行反應。

 

 

在這些方法中常用的主要有氯仿提取法、稀釋加熱法以及高氯酸PCA法和新高氯酸New PCA其中前兩種方法由于內毒素回收率﹑假陽性等問題的存在因此在測定時需要探討PCANew PCA,由于添加內毒素的回收率好,目前在日本主要用于臨床前處理。

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