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在線脫氣機是運用真空脫氣原理進行工作的。當流動相在液相泵帶動下通過置于真空倉中的脫氣管時，管內外產生的壓力差可使得原流動相中的氣泡分子從分離膜內不斷析出。真空倉內脫氣管設計長度可以滿足一般常規流量的脫氣要求。
在線脫氣機是專為高效液相色譜儀配套設計的脫氣裝置，可在高效液相色譜分析系統中，尤其是多元梯度洗脫時，溶解在流動相溶劑中的氣體，在混合時以氣泡形式逸出，保證色譜柱的分離效率，穩定檢測器基線的穩定性，提高靈敏度，使得高效液相色譜系統正常工作，在線脫氣機廣泛應用在生物工程、醫藥衛生、食品研究、防腐保鮮等領域的脫氧處理上。
在線脫氣機可以連續不斷地從流動相中除去氣體，消除流動相的不穩定因素和降低基線漂移及噪音，從而消除了對電化學、熒光和紫外檢測氧的干擾。在線脫氣機采用先進的氣/液膜分離技術，選用進口原裝傳感器，能自動啟動真空泵以保證脫氣效果。標準的接頭及管路使之可與各種型號的HPLC系統連接。在線脫氣機接于HPLC的流動相存儲液瓶與高壓恒流泵之間。流動相經由在線脫氣機的入口進入脫氣機中，在獨立的單元真空泵腔內，通過預先設定的真空度，真空泵連續低速運行，HPLC流動相在泵的作用下流經真空腔內一段很短的Teflon AF脫氣膜管，按照Henry’s定律，在真空作用下，溶劑中溶解的氣體通過管壁排出。
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