手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
目前有多種蛋白標記技術來幫助我們研究感興趣的蛋白質的豐度、位置、相互作用、翻譯后修飾、功能，乃至監(jiān)測活細胞中的蛋白質運輸?shù)葐栴}。目前有多種類型的標記物和標記方式可供選擇，但是針對特定的應用應當選擇適合的標記策略。
代謝標記策略
代謝標記策略是一種體內標記方法，在這種方法中，細胞被“喂養(yǎng)”了化學標記的營養(yǎng)物，然后這些標記物被摻入新合成的蛋白質、核酸或代謝物中。然后，我們可以收集細胞并分離這些分子以獲得細胞生物過程的全局視圖。
蛋白同位素標記
原理：蛋白同位素標記是一種經(jīng)典的蛋白示蹤和蛋白組學定量技術，用天然同位素（輕型）或穩(wěn)定同位素（重型）標記的必需氨基酸取代細胞培養(yǎng)基中相應氨基酸，這樣細胞新合成的蛋白質可以在細胞生長期間通過摻入含有不同同位素的氨基酸進行標記。
應用舉例：蛋白質組學研究方向流行的代謝標記方法是SILAC（Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture），即細胞培養(yǎng)中氨基酸的穩(wěn)定同位素標記。結合質譜技術，SILAC通過使用重型氨基酸（例如，15N-或13C-賴氨酸）標記其中一組培養(yǎng)物或細胞系，而向另一組添加正常的輕型氨基酸，從而量化兩種培養(yǎng)物或細胞系之間蛋白質豐度的差異。然后將在這兩種條件下生長的細胞的裂解蛋白按細胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進行質譜鑒定，根據(jù)一級質譜圖中兩個同位素型肽段的面積比較進行相對定量，得到兩種條件下蛋白質豐度差異的相對評估。
其他蛋白質代謝標記物
原理：如果不具備質譜實驗條件，那么可以使用基于生物正交反應的代謝標記方法。在生物正交系統(tǒng)中，細胞被“喂食”標記有一些對天然生物反應基團無反應的化學基團的分子結構單元。添加含有該基團的反應配偶體的外源性化合物引發(fā)化學反應，將標記的生物分子偶聯(lián)至所需的官能團。
應用舉例：用含有疊氮基團的結構單元“喂養(yǎng)”細胞，然后在實驗后用含有磷化H基團的試劑進行處理，疊氮化物和-PH2基團通過Staudinger連接反應偶聯(lián)，疊氮化物和膦基團通常不存在于生物系統(tǒng)中，因此這些分子是惰性的。
相關產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心