手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
原理
用人結腸癌細胞為免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人結腸癌細胞表面抗原（Ag）的單克隆抗體 IgG（第一抗體），二者可以發生特異性的抗原抗體反應，形成抗原抗體復合物，再加入市售（也可自制）的熒光標記的羊抗鼠IgG抗體（第二抗體），可以與復合物進一步發生抗原抗體反應（二次抗體反應），這樣就可以在光顯微鏡下觀察到這種抗原在結腸癌細胞表面的存在。
材料與儀器
HeLa細胞
1640培養液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液體石蠟
蓋片 載片 培養瓶 培養皿 濾紙 鑷子 吸管 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 微量加樣器
1640培養液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液體石蠟
蓋片 載片 培養瓶 培養皿 濾紙 鑷子 吸管 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 微量加樣器
步驟
1. 將培養瓶中的結腸癌細胞接種到裝有蓋片的培養皿中，培養2~3天。
2. 在倒置鏡下觀察到蓋片上的細胞生長狀態良好后，在蓋片左上角用玻璃筆做一下標記，以免在以后的操作中正反面顛倒。
3. 將蓋片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分鐘。
4. 用PBS洗三次，注意不要將PBS液直接倒在蓋片的細胞面，以免引起細胞大量丟失。用濾紙片將蓋片上的PBS輕輕吸干，不要損傷細胞層。
5. 將已稀釋好的小鼠抗體滴在蓋片上．每個蓋片50 ul，37℃溫育30分鐘。
6. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
7. 將已稀釋好的熒光標記羊抗鼠二次抗體5ul滴加在蓋片上，37℃溫育30分鐘。
8. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
2. 在倒置鏡下觀察到蓋片上的細胞生長狀態良好后，在蓋片左上角用玻璃筆做一下標記，以免在以后的操作中正反面顛倒。
3. 將蓋片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分鐘。
4. 用PBS洗三次，注意不要將PBS液直接倒在蓋片的細胞面，以免引起細胞大量丟失。用濾紙片將蓋片上的PBS輕輕吸干，不要損傷細胞層。
5. 將已稀釋好的小鼠抗體滴在蓋片上．每個蓋片50 ul，37℃溫育30分鐘。
6. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
7. 將已稀釋好的熒光標記羊抗鼠二次抗體5ul滴加在蓋片上，37℃溫育30分鐘。
8. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
9. 將載片上滴一滴液體石蠟。然后將蓋片細胞面朝下放到載玻片上，在熒光顯微鏡下觀察。
以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務，努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心