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【瑞士步琦】通過SFC超臨界流體色譜分離純化甜葉菊提取物中甜菊苷的方法
分離純化甜葉菊提取物中甜菊苷
甜菊糖苷（結構式見圖1 (b)）屬于甜菊醇糖苷，甜菊糖苷是甜菊屬植物的甜味來源。甜菊糖的增甜能力比蔗糖的甜度高許多倍，因此是一種糖的替代品。自 2011 年以來，甜菊糖苷已被歐盟批準為食品添加劑 E960。甜葉菊本身還沒有被批準作為一種食品。
本文介紹了一種使用 BUCHI Sepiatec SFC 設備從甜葉菊提取物當中分離得到甜菊糖苷的方法。分離過程所使用食品級CO2、乙醇和水作為添加劑。
實驗條件
設備 | Sepiatec SFC-50 |
色譜柱 | prep HPLC column Nucleodur Si 5um 250 x 4.0m |
流動相種類 | A=CO2（100%） B=乙醇/水（95/5） |
流動相條件 | 0-2min：95%A/5%B 2-25min：5-35%B 25-31min：35%B |
樣品 | 200mg/mL 乙醇甜葉菊提取物 |
以 95%A/5%B，4mL/min流速條件對色譜柱平衡 5min。通過自動進樣器進樣并開始運行分離程序，UV檢測波長設定為 210nm，背壓調節閥設定為 150bar，柱溫箱溫度為 40℃，得到如下分離圖譜：
▲ 圖1：(a)甜葉菊提取物的純化
以及(b)對 24 號組分進行 HPLC 純化分析
結果與討論
圖1(a)展示了甜葉菊提取物的色譜圖，通過乙醇對甜葉菊進行提取得到了很多化合物，甜菊糖苷作為極性分子與色譜柱的極性固定相（Slica）發生了強烈的相互作用。因此，當流動相的整體梯度極性增加是，甜菊糖苷得以被洗脫。圖1(a)表明其純度非常高。除此之外，甜菊糖苷也是提取物中甜度最高的化合物，并且可從甜菊糖總甙中的甜菊雙糖苷中分離得到。
食品性質的物質提純一般更偏向于使用乙醇。反相色譜所使用的典型溶劑甲醇或乙腈往往與食品特性不太符合的。由于流動相整體極性的增加，所以水作為添加劑可以有效改善待測分析物的峰型。
結論
使用制備型 SFC 可以有效地將甜菊糖苷從甜葉菊提取物中分離得到。通過 SFC 以及符合食品要求的溶劑可以對食品提取物進行純化。
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