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6孔板轉染細胞實驗步驟

來源:上海吉至生化科技有限公司   2023年04月07日 10:49  

1.轉染前一天接種細胞于6孔板,5×104每孔,第二天轉染時細胞匯合度達到60%-70%每孔。
2.轉染前半小時將完、全培養基換無血清培養基1.9 ml。
3.A液:RNA 100 pmol/DNA 2μg (根據核酸類型不同,用量不同)加入50 ul Opti-MEM無血清培養基,輕輕混勻,室溫靜置5min。
4.B液:脂質體使用前輕輕混勻,脂質體5ul 加入50 ul Opti-MEM無血清培養基,輕輕混勻,室溫靜置5min。
5.B液加入到A液中,用槍輕輕混勻,室溫靜止20min。
6.將混合液均勻分散慢慢滴加到6孔板細胞中,邊滴加邊前后左右十字交叉輕輕搖晃。
7.孵箱37℃培養4~6h,然后將無血清培養基換成完、全培養基繼續培養。
8.mRNA 水平的檢測:在轉染后24-48h后,用Real-time PCR的方法在mRNA水平進行檢測。
9.蛋白水平的檢測:在轉染后48-72h后,用Western-blot或免疫組化的方法在蛋白水平進行檢測。


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