研究表明，由于過度的壓力負荷，椎間盤細胞的凋亡減少了椎間盤中活性細胞的數量，從而減少了細胞外基質（ECM）的合成并改變了其組成，這是IVDD的重要病因。此外，發現線粒體和內質網介導的細胞凋亡通路參與了循環拉伸誘導的大鼠纖維環細胞（AF）細胞凋亡，然而，抑制這兩種通路并不能wan'quan阻止細胞凋亡。這表明循環拉伸誘導的椎間盤細胞凋亡的機制的復雜性。

ROS和氧化應激主要通過調節核因子κβ（NF-κB）通路、絲裂原活化蛋白激酶通路和磷脂酰肌醇3激酶通路，對各種骨骼和肌肉疾病產生致病作用。正常椎間盤組織的特征是缺乏血管引起的缺氧微環境。之前，氧化應激被認為與IVDD無關。然而，最近的多項研究證實，椎間盤細胞在椎間盤微環境中代謝體內氧氣并產生ROS，從而作為調節ECM代謝、促炎因子表型、細胞凋亡、自噬和衰老的重要介質。

柚皮苷又稱柚苷、柑橘苷，是一種天然的黃酮類化合物，具有多種生物學作用，包括抗氧化、血管生成和抗炎等。柚皮苷的保護作用主要通過調節各種器官中的各種酶促和非酶促抗氧化參數（增加GSH，GPx，SOD和CAT以及降低MDA）介導的。骨碎補（Rhizoma Drynariae）是一種傳統中藥，在中國通常用于治療退行性椎間盤疾病和骨質疏松癥，然而，其作用機制仍不清楚。研究表明，柚皮苷可抑制氧化應激誘導的髓核細胞和間充質干細胞凋亡，抑制炎癥介質的釋放，調節椎間盤ECM代謝，延緩IVDD。此外，已證實柚皮苷可以抑制疼痛介質的釋放，緩解椎間盤性腰痛，并抑制IVDD。因此，柚皮苷可能是治療IVDD相關疾病的合適候選者。然而，柚皮苷對循環拉伸誘導的椎間盤細胞凋亡的影響尚不清楚。

基于此，上海交通大學醫學院附屬新華醫院脊柱中心、附屬仁濟醫院中醫科以及揚中市中醫院骨傷科的研究團隊曾探討了柚皮苷對循環拉伸誘導的氧化應激、細胞凋亡和IVDD的影響及其體外和體內機制，為柚皮苷在IVDD治療中的應用提供了理論依據。

柚皮苷改善循環拉伸誘導的大鼠 AF 細胞凋亡

將大鼠AF細胞置于循環拉伸（0.5?Hz，20%）下36 h，體外實驗組如下：對照組-靜態細胞；拉伸組-未經柚皮苷處理（0 μg/mL）拉伸的細胞；柚皮苷處理組-以低（50 μg/mL）或高（100 μg/mL）濃度柚皮苷處理的拉伸細胞。拉伸36 h后，細胞逐漸表現出凋亡形態，用高濃度和低濃度柚皮苷處理可抑制這些作用。Hoechst 33258染色顯示染色質固縮和核分裂顯著增加，柚皮苷可有效抑制。流式細胞術分析進一步顯示，對照組大鼠AF細胞凋亡率僅為2.3±0.8%，而拉伸組凋亡率提高至34.1±1.6%。此外，與拉伸組相比，柚皮苷高、低濃度組的細胞凋亡率顯著降低。

柚皮苷抑制大鼠 AF 細胞中循環拉伸誘導的 Caspase-3 和 Caspase-9 的活化

循環拉伸36 h后，拉伸組cleaved caspase-3 （活化形式）和caspase-9 水平顯著升高。相比之下，與拉伸組相比，柚皮苷高、低濃度組的cleaved caspase-3 和caspase-9 水平受到顯著抑制。

柚皮苷抑制循環拉伸誘導的線粒體膜電位去極化和細胞色素C 釋放

循環拉伸36 h后，可以發現其抑制了線粒體膜電位。與拉伸組相比，柚皮苷高、低濃度組線粒體膜電位顯著增加，但未達到對照組水平。實驗結果表明，柚皮苷抑制了AF細胞中循環拉伸誘導的線粒體膜電位去極化（圖1 a、b）。此外，循環拉伸36 h后細胞色素C的胞質水平顯著增加，但柚皮苷顯著抑制了柚皮苷高、低濃度組細胞色素C向細胞質中的釋放（圖1 c、d）。

圖1   柚皮苷對周期性拉伸誘導線粒體損傷的影響。

（a）循環拉伸36小時后用JC-1染色的細胞的代表性圖像。（b）紅綠熒光強度比值用于測定線粒體膜電位并進行半定量分析。（c）用于檢測細胞質細胞色素C的代表性蛋白質印跡。（d）細胞質細胞色素C水平的半定量分析，和拉伸組比較。

柚皮苷抑制循環拉伸誘導的氧化應激

與對照組相比，拉伸組ROS和MDA水平顯著升高，SOD和GPx水平顯著降低。與拉伸組相比，高、低濃度柚皮苷處理組ROS和MDA水平顯著下降，SOD和GPx水平顯著升高。這些結果表明，柚皮苷可以抑制AF細胞中循環拉伸誘導的氧化應激。

柚皮苷抑制循環拉伸誘導的 NF-κB 信號通路的激活

與對照組相比，拉伸組p-Iκ Bα和p-P65的表達顯著增加。與拉伸組相比，高、低濃度柚皮苷處理組p-IκBα和p-P65蛋白表達顯著下降。此外，兩組間總P65表達未見顯著變化。這些結果表明，柚皮苷抑制了循環拉伸誘導的 IκBα/NF-κB通路的活化（圖2 a、b）。

圖2   柚皮苷對NF-κB通路標志物（蛋白質）水平的影響。

（a）代表性蛋白質印跡，顯示柚皮苷對循環拉伸暴露 36 小時后 p-IκBα、p-P65 和 P36 蛋白表達的影響。（b）p-IκBα、p-P65 和 P65 表達的半定量分析。

柚皮苷延緩椎間盤退變

MRI 顯示假手術組椎間盤正常。3個月后，高濃度和低濃度柚皮處理組的椎間盤MRI顯示出比IVDD組更強的信號強度，IVDD組顯示信號較弱。此外，使用Pfirrmann等級評估椎間盤退變程度，與IVDD組相比，高濃度和低濃度柚皮苷治療組的椎間盤退變程度顯著降低（更好），盡管兩個處理組之間沒有觀察到顯著差異。

柚皮苷略微降低 IVDD 分級

3個月后，對照組的椎間盤呈現正常或輕度蛇紋石外觀，而IVDD組和兩個柚皮苷處理組的椎間盤顯示輕度至中度蛇紋石外觀，輪廓反轉，破裂或結構模糊。同時，與IVDD組相比，高濃度和低濃度柚皮苷處理組的退變程度略有下降，但差異不顯著。

柚皮苷抑制 AF 細胞原位凋亡

在處理后3個月，與其他三組相比，對照大鼠的椎間盤內可見的凋亡細胞較少。同時，高濃度和低濃度柚皮苷處理組的細胞凋亡率顯著低于IVDD組。

柚皮苷可抑制I型膠原蛋白和MMP-3原位表達的增加

I型膠原表達的增加是IVDD的指標。免疫組織化學顯示，IVDD組I型膠原染色率高于假手術組。I型膠原蛋白在高、低濃度柚皮苷處理組中的表達低于IVDD組。作為一種分解代謝酶，MMP-3表現出與I型膠原蛋白相似的表達趨勢。

柚皮苷抑制 IVDD 大鼠血清和椎間盤組織中的氧化應激

與假手術組相比，高、低濃度柚皮苷處理組血清和椎間盤中ROS和MDA水平升高，SOD和GPx活性顯著降低。然而，與IVDD組相比，高、低濃度柚皮苷處理組的ROS和MDA水平顯著下降，SOD和GPx活性顯著增加。這些結果表明，柚皮苷可以降低大鼠靜態和動態不平衡引起的氧化應激水平（圖3 a、d）。

圖3   柚皮苷對動態和靜態力不平衡誘導的大鼠腰椎間盤退變（IVDD）氧化應激和p-P65表達的影響。

（a-d）柚皮苷對血清和椎間盤組織中氧化應激的影響：（a）活性氧（ROS）產生，（b）丙二醛（MDA），（c）超氧化物歧化酶（SOD）和（d）谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）水平。（e）柚皮苷對椎間盤p-P65表達的影響。p-P65在高濃度和低濃度柚皮苷處理組中的表達低于IVDD組。

柚皮苷抑制 p-p65 原位表達

免疫組織化學顯示，p-P65在高濃度和低濃度柚皮苷處理組中的表達顯著低于IVDD組。然而，兩個組之間沒有觀察到顯著差異（圖3 e）。

總之，該研究表明柚皮苷可以通過抑制氧化應激和NF-κB信號通路的激活來減少循環拉伸誘導的AF細胞凋亡并延緩IVDD。因此，它可以作為IVDD的潛在治療藥物。然而，由于柚皮苷具有多種藥理學特性，因此在臨床應用之前應探索其對其他組織和器官的全身作用。

參考文獻：Zhang YH, Shangguan WJ, Zhao ZJ, Zhou FC, Liu HT, Liang ZH, Song J, Shao J. Naringin Inhibits Apoptosis Induced by Cyclic Stretch in Rat Annular Cells and Partially Attenuates Disc Degeneration by Inhibiting the ROS/NF-κB Pathway. Oxid Med Cell Longev. 2022 Feb 23;2022:6179444. doi: 10.1155/2022/6179444. PMID: 35251479; PMCID: PMC8890877.