手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
結(jié)合物即酶標(biāo)記的抗體（或抗原），是ELISA中至關(guān)重要的關(guān)鍵的試劑。良好的結(jié)合物應(yīng)該是既保有酶的催化活性，也保持了抗體（或抗原）的免疫活性。結(jié)合物中酶與抗體（或抗原）之間有恰當(dāng)?shù)姆肿颖壤诮Y(jié)合試劑中應(yīng)盡量不含有或少含有游離的（未結(jié)合的）酶或游離的抗體（或抗原），此外，結(jié)合物尚要有良好的穩(wěn)定性。
用于ELISA的酶應(yīng)符合以下要求：
①純度高
②催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高
③專一性強(qiáng)
④性質(zhì)穩(wěn)定
⑤來源豐富
⑥價格不貴
⑦制備成酶結(jié)合物后仍繼續(xù)保存它的活性部分和催化能力
⑧在受檢標(biāo)本中不存在相同的酶
⑨相應(yīng)底物易于制備和保存，價格低廉，有色產(chǎn)物易于測定等
在ELISA中，常用的酶為辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶。在少數(shù)商品ELISA試劑中，應(yīng)用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。國產(chǎn)ELISA試劑一般都用HRP制備結(jié)合物。HRP是一種糖蛋白，含糖量約為18%，分子量為44000，是一種復(fù)合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結(jié)合而成，是一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶無色糖蛋白在275nm波優(yōu)點有高吸收峰，輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán)，在403nm波優(yōu)點有高吸收峰。HRP的純度用RZ(Reinheit Zahl，德文，意為純度數(shù)）表示，是403nm的吸光度與280nm吸光度之比，高純度的HRP的RZ≥7.0。
HRP除符合上述的ELISA中標(biāo)記酶的要求外，更有價格低廉和性質(zhì)較穩(wěn)定的特點。值得留意的是，在選用酶制劑時，除其純度RZ外，更應(yīng)留意酶的活力。高純度的酶如保存不當(dāng)，活力也會降低。酶制劑的活力以所含的酶活力單位表示，可用對底物作用后天生產(chǎn)物量的測定進(jìn)行試驗。
國外很多ELISA試劑采用堿性磷酸酶（AP）作為標(biāo)記酶。常用的AP有兩個來源，分別從大腸桿菌和小牛腸膜中提取。不同來源的酶生化特性特性略不相同，從大腸桿菌中提取的AP分子量為80000，酶作用的適合pH為8.0；用小牛腸膜中提取的AP分子量為100000，適宜pH為9.6。在ELISA中，AP系統(tǒng)的敏感度一般高于HRP系統(tǒng)，空缺值也較低，但AP價格昂貴，制備結(jié)合物所得率也較HRP低。
制備結(jié)合物時所用抗體一般 均為純度較高的IgG，以免在與酶聯(lián)結(jié)時其他雜蛋白的干擾。用親和層析純的抗體，這樣全部酶結(jié)合物均具有特異的免疫活性，可以在高稀釋度進(jìn)行反應(yīng)，實驗結(jié)果本底淺淡。如用F(ab)2進(jìn)行標(biāo)記，則更可避免標(biāo)本中RF的干擾。在ELISA中用酶標(biāo)抗原的模式未幾，總的要求是抗原必須是高純度的。
用于稀釋高濃度的結(jié)合物以配成工作液。為避免結(jié)合物在反應(yīng)中直接吸附在固相載體上，在稀釋緩沖液中常加進(jìn)高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)（例如1%牛血清白蛋白），通過競爭以抑制結(jié)合物的吸附。一般還加進(jìn)具有抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20，0.05%的濃度較為適宜。在間接測定抗體時，血清標(biāo)本需稀釋后進(jìn)行測定，也可應(yīng)用這種稀釋液。
上海恒遠(yuǎn)幫您輕松搞定實驗，我司可提供上萬種ELISA試劑盒及其相關(guān)科研產(chǎn)品，檢測對象有抗凝全血、多纖維全血、各種動植物血漿（血清）等，以生產(chǎn)高品質(zhì)、低價格的產(chǎn)品為已任，受到眾多所科研單位青睞。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心