本生簡述:血清使用中的常見問題解答
1, 血清存儲方法?
血清一般儲存于-20℃,同時應避免反復凍融。購買大包裝的血清后,若無法一次用完,建議分裝成小包裝,儲存于-20℃。
2, 如何解凍血清?
使用前融化,融化時最好先置于2-8℃冰箱中使之溶解,然后在室溫下使之全溶,溶解過程
中必須規則地搖晃均勻。融化后的血清在4℃不宜長時間存放,應盡快使用。
3,血清的使用濃度是多大?
使用濃度一般為5-20%,常用是10%。過多血清容易使培養中的細胞發生變化,特別是一些二倍體的無限細胞系,迅速生長之后容易發生惡性轉化。
4,血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
血清中沉淀物的出現有許多原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性造成的;而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成血清沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。 若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管中,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
5.何謂熱滅活?有必要做熱滅活嗎?
一般以56℃,30分鐘水浴來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活性,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經過處理的血清對細胞生長只有微小的促進,或沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱滅活這一步。如此以來,不但節省您寶貴的時間,更確保您血清的質量!
6.如何避免沉淀物的出現?
我們建議您在使用血清的時候,注意正確的血清解凍步驟,并盡量避免滅活血清及長時間的將血清置于高溫環境中。
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