可能原因 1:引物問題(包括:引物二聚體太多)。
解決方法:檢查引物設計環節和合成環節,必要時重新設計和合成引物。
可能原因 2:擴增酶問題。
解決辦法:選擇 hot start Taq 酶進行擴增,可提高靈敏度,增加特異性。
可能原因 3:檢測溫度太低。
解決辦法:在更高的溫度下檢測熒光信號。這個時候,引物二聚體已經解鏈。
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