ELISA簡要操作步驟及原理以雙抗體夾心法為例，ELISA簡要操作步驟如下：

包被抗體包被到酶標板,加樣本/標準品,加生物素標記的檢測抗體,加HRP標記的鏈霉親和素

加顯色底物TMB,加終止液,ELISA 試劑盒組分酶標板（Microplate）,酶標板，在ELISA（酶聯免疫吸附測定）中作為載體的酶標板對抗原抗體或抗原抗體復合物的吸附起著重要作用。

標準品（Standard）

標準品即為已知濃度的目標物(樣本中待測因子)的純蛋白，對標準品進行梯度稀釋，用于制作標準曲線。

生物素標記的檢測抗體(Detected Antibody)

檢測抗體即為與目標物特異性結合的抗原/抗體鑒于酶標二抗的局限性，現在廠家一般引入生物素親和素系統(biotin avidin system,BAS)。

洗滌液(Washing Buffer)

長時間的孵育后，會出現非特異性結合，這時就需要洗滌液來洗去非特異性結合的蛋白或抗體。常用的洗滌液有:磷酸鹽緩沖液(PBS)、平衡鹽緩沖液(BBS)等。

辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(HRP-Streptavidin)

鏈霉親和素是Streptomyces avidinii(阿維丁鏈霉菌)的分泌物。鏈霉親和素分子由4條相同的膚鏈組成，非特異性結合遠比親和素低。在ELISA試劑盒中，用于與檢測抗體上的生物素相結合。

顯色底物 (TMB)

TMB在過氧化氫存在的情況下可被HRP或其他過氧化物酶催化生成可溶的藍色物一價物。當顯色反應被酸性溶液終止后，產物由藍色一價物轉為二價物，此時可在450nm 測定吸光度檢測。