上海西唐生物,Western Blot實驗服務
原價1000元一張膜,*800元。
【實驗原理】: Western Blot 印跡方法,又稱為免疫印記,是將獲得的蛋白質樣品通
過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,對不同分子量的蛋白質進行分離,并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物(NC膜或PVDF 膜)上,用抗靶蛋白的非標記抗體(一抗)與轉印后膜上的靶蛋白進行特異性結合,再與經辣根過氧化物酶標記(偶聯)的二抗結合,zui后用ECL超敏發光液試劑檢測。如果轉印膜上含有靶蛋白,經X 光片曝光、 顯影后,則會在X-光片上出現特異性蛋白條帶。
Western blot 實驗分為三個部分:
1. 樣品蛋白質的制備、 蛋白質含量測定 2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
3. 凝膠轉膜及其檢測
以提取細胞蛋白為例Western 印記雜交實驗流程圖:
提取細胞總蛋白、測定含量
↓
制備SDS-PAGE 膠
↓
蛋白樣品變性、電泳
↓
電泳轉膜
↓
封閉
↓
一抗
↓
TBST 洗滌
↓
HRP 標記的二抗
↓
TBST 洗滌
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