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Western Blot 相關技術操作與原理

來源:上海西唐生物科技有限公司   2011年10月13日 14:19  

上海西唐生物,Western Blot實驗服務

原價1000元一張膜,*800元。

【實驗原理】: Western Blot 印跡方法,又稱為免疫印記,是將獲得的蛋白質樣品通

過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,對不同分子量的蛋白質進行分離,并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物(NC膜或PVDF 膜)上,用抗靶蛋白的非標記抗體(一抗)與轉印后膜上的靶蛋白進行特異性結合,再與經辣根過氧化物酶標記(偶聯)的二抗結合,zui后用ECL超敏發光液試劑檢測。如果轉印膜上含有靶蛋白,經X 光片曝光、 顯影后,則會在X-光片上出現特異性蛋白條帶。

Western blot 實驗分為三個部分:

1. 樣品蛋白質的制備、 蛋白質含量測定 2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

3. 凝膠轉膜及其檢測

以提取細胞蛋白為例Western 印記雜交實驗流程圖: 

提取細胞總蛋白、測定含量

制備SDS-PAGE 膠

蛋白樣品變性、電泳

電泳轉膜

封閉

一抗

TBST 洗滌

HRP 標記的二抗

TBST 洗滌

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