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1.選擇一根適合的色譜柱，常為C18柱。
2.準備流動相時僅使用HPLC級別的水和色譜級試劑；
3.選擇能給出最佳分離度的流動相成分和濃度。
4.如果樣品中有非離子化物質，在嘗試離子化分離之前首先優(yōu)化分離情況。
5.選擇合適的離子對系列試劑以提供相應的離子配對：對于酸性分析物使用酸性離子對試劑；對于堿性分析物使用堿性離子對試劑。
6.通過比較選擇所得分離度較好的離子對試劑。
7.一旦離子對試劑已經確定，調節(jié)流動相的pH值將分離度較大化；因為微小的pH值改變對保留性質和選擇性都有較大的影響，所以仔細小心的小幅度調節(jié)pH值。
8.理想狀況下，流動相中的離子對試劑濃度應為0.005M，但是稍微增加離子對試劑可能會稍微增加保留性質并因此優(yōu)化分離情況。
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