做好這幾步，輕松明白ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線分析步驟

來源：上海信帆生物科技有限公司 2023年08月03日 13:59

做好這幾步，輕松明白ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線分析步驟

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ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線分析步驟

1. 標(biāo)曲和樣本孔的每個(gè)孔450nm的OD值減去630nm（或570nm）的OD值；

2. 再將獲得的標(biāo)曲和樣本孔數(shù)據(jù)分別減去空白孔Blank的OD值；

3. 以標(biāo)曲的濃度為橫坐標(biāo)，以上算出的OD值為縱坐標(biāo)，擬合標(biāo)曲（選擇R2值大于0.99的比較好的擬合方式，必要時(shí)可以刪除個(gè)別差異較大的標(biāo)曲點(diǎn)進(jìn)行擬合）

4. 計(jì)算樣本值，將樣本減去空白孔的OD值復(fù)制，選軟件中的“粘貼”，得到的X值再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)就是最終的濃度值。

1.很多 Kit 可以同時(shí)用多種方式進(jìn)行擬合；

2.除了試劑盒推薦的擬合方式，其他的擬合方式也可以嘗試；

3.雙抗夾心法可以選擇直線，二次，四參數(shù)三種；可以直接擬合，也可以采用扣除 O 孔本底后取對(duì)數(shù)的方式；

4.取單數(shù)可以采用單對(duì)數(shù)，或者雙對(duì)數(shù)法都可以；單對(duì)數(shù)就是 X 值（濃度值取對(duì)數(shù)）；

5.Logit-log的擬合方法是用于競(jìng)爭(zhēng)法的；競(jìng)爭(zhēng)法也可以用四參數(shù)或者五參數(shù)的方式進(jìn)行擬合。

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