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Exonuclease I：特異性去除單鏈DNA，PCR引物去除的選擇
核酸外切酶I（Exonuclease I）是一種對變性或單鏈脫氧核糖核酸具有高度選擇性的核酸外切酶，作用時，Exonuclease I從單鏈聚脫氧核糖核苷酸的3 羥基端開始攻擊，隨后逐步釋放出脫氧核糖核苷5 ' -單磷酸鹽，但末端二核苷酸會保持完整，對雙鏈DNA或RNA無活性。常用于在Sanger測序或SNP分析之前去除PCR反應中的單鏈引物、去除巢式PCR中的單鏈引物、PCR產物酶法純化、從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA等。
圖1. Exonuclease I降解單鏈DNA示意圖
翌圣的Exonuclease I（Cat#14535ES）由分子酶改造平臺——ZymeEditor™重組表達而來，可高效消化單鏈DNA，嚴格質控，無核酸外切酶（雙鏈）、核酸內切酶、RNase殘留，80℃處理即可失活，適用于各種PCR反應后引物的去除及從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA。
20 μL反應體系中加入終濃度為15 pmol/μL的單鏈DNA底物，分別使用不同投入量（0.63、1.25、2.5、5、10、20 U）的翌圣及進口品牌N*的Exonuclease I在37℃下孵育15 min，80℃熱失活15 min，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測單鏈DNA降解情況。結果顯示翌圣的Exonuclease I消化單鏈DNA的能力與進口品牌N*一致。
圖2. 翌圣及進口品牌N*對單鏈DNA的消化能力
將500 ng底物DNA與100 U的Exonuclease I在37℃下孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA條帶不發生變化，表明Exonuclease I無核酸內切酶殘留。
圖3. 核酸內切酶殘留檢測
將底物RNA與20 U的Exonuclease I在37℃下孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA條帶不發生變化，表明Exonuclease I無RNase殘留。
圖4. RNase殘留檢測
定位 | 產品名稱 | 產品貨號 |
PCR產物純化（核酸外切酶I+堿性磷酸酶）
| Exonuclease I (20 U/μL) | 14535ES |
Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) | 10322ES | |
高保真PCR預混液 | 2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) | 10164ES |
瓊脂糖 | Agarose | 10208ES |
核酸染料 | YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in Water) | 10202ES |
DNA Marker | GoldBand系列marker | 10501ES-10518ES |
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