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產品詳情
UDG酶可催化水解DNA中的尿嘧啶堿基與核糖之間的N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶堿基。本產品來源于大腸桿菌重組表達的嗜冷細菌的ung基因，分子量為 25KDa。本酶催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈 DNA 釋放游離尿嘧啶，對 RNA 無活性。本酶主要應用于防止PCR 擴增產物的交叉污染。它的作用原理基于：在 PCR 反應中以 dUTP 替代 dTTP 摻入 DNA 中，形成含 dU 堿基的 PCR 擴增產物，UDG 能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 dU 堿基的糖苷鍵，降解 PCR 擴增產物，消除上輪擴增產物對新樣本的污染問題。
特點
? 25-37度范圍內活性高，避免了ji端熱敏UDG常溫失活的缺陷；
? 本酶在60℃下熱處理10分鐘，完quan不可逆失活；
? 本酶的反應體系與Taq DNA聚合酶buffer相同，保證了活性體系的一致性。
濃度
1U/μl
活性定義
37℃反應條件下，每分鐘催化 60 pmole尿嘧啶堿基從含尿嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量為 1 U。
活性測定條件
10 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 20 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 0.01% Tween 20, 1.5 mM MgCl2 中，37℃ 溫育。
酶貯存緩沖液
20mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween 20, 50% glycerol。
產品包裝規格及組成
Component | 78DC10123-200U | 78DC10123-1000U |
熱敏UDG | 200U | 1000U |
10×UDG Buffer | 0.4 ml×1 | 1.0 ml×1 |
運輸與保存
-20℃保存 藍冰運輸
適用范圍
主要應用于防止PCR 擴增產物的交叉污染。作用原理基于：在 PCR 反應中以 dUTP 替代 dTTP 摻入 DNA 中，形成了含 dU 堿基的 PCR 擴增產物，UDG能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 U 堿基的糖苷鍵，降解 PCR 擴增產物，消除上輪擴增產物對新樣本的污染問題。
應用舉例
防止PCR產物污染的使用方法
1. 按如下表格配制PCR反應液
PCR組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq酶 Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
dUTP（2.0 mM） | 1-5 | 0.04-0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
熱啟動Taq聚合酶（2.5U/μl） | 1.0 | 2.5U |
熱敏UDG（1U/μl） | 1.0 | 1U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
2. 37℃下反應10分鐘。
3. 在95℃下熱失活UDG 2分鐘（此步驟可省略，直接進行PCR，預變性步驟會失活UDG）。
4. PCR反應。
質量控制
無內切酶活性：50 U的本酶和1 μg的pBR322 DNA在37℃下反應2小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
| 品名 | 貨號 | 規格 | 品牌 |
| 熱敏UDG酶 | 78DC10123-200U | 200U | BIOHUB |
| 熱敏UDG酶 | 78DC10123-1000U | 1000U | BIOHUB |
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