原理：

1. 當溫度低至-70℃時，細胞內的酶活性全部停止，代謝活動停止，故實現長期保存的目的。

2. 隨著溫度降低，細胞內外的水分都會結晶，所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞，從而引起細胞死亡，特別是0~-20℃的階段，冰晶呈針狀，及其引發細胞損傷。在不加任何保護劑條件下直接凍存細胞時，細胞內和外環境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。

3. 常見的冷凍保護劑是甘油或二甲基亞砜（DMSO）。DMSO能快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點，延緩凍存過程，同時增加細胞膜的通透性，提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成，從而達到保護細胞的目的。

注意事項：

1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存，但**為對數生長期細胞。在凍存前一天**換一次培養液;

2、將凍存管放入液氮灌或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷;

3、凍存和復蘇**用新配制的培養液。

4、取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項特別重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。