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技術分享 | 細胞培養技巧之細胞傳代

來源:上海潤度生物科技有限公司   2023年08月28日 11:54  
專注于細胞培養解決方案
 
細胞傳代是細胞培養中非常重要的一個步驟,用于維持和擴增特定細胞系的數量。細胞傳代的目的是保持細胞的健康狀態、避免細胞老化和突變,并保證細胞的穩定性和一致性。
 
細胞代傳
 
貼壁細胞傳代
 
培養器皿選擇:選擇適合貼壁細胞傳代的培養器皿,確保器皿表面干凈、無菌。
 
細胞密度控制:根據細胞生長情況,控制細胞的密度。通常在細胞生長至80%~90%的密度時,適合進行傳代。
 
細胞分離:使用胰蛋白酶等消化酶對細胞進行消化,以將細胞從培養器皿表面分離。消化時間和酶的濃度應根據細胞類型來確定。
 
細胞計數:對細胞進行計數,以確定傳代時需要接種的細胞數量。
 
細胞離心:將細胞培養液進行離心,以沉淀細胞。離心速度和時間應根據細胞類型來確定。
 
細胞接種:去上清,加適量新鮮完全培養液吹打重懸細胞。然后轉移適量細胞懸液至新培養瓶中,再加入一定量完全培養液,輕輕搖晃培養器皿,使細胞均勻分布。
 
培養條件:將培養器皿放置二氧化碳培養箱中,并提供適當的培養條件,如溫度、濕度和CO2濃度。遵循細胞系的特定培養條件,以確保其正常生長和增殖。
 
懸浮細胞傳代
 
細胞密度控制:根據細胞生長情況,控制細胞的密度。通常在細胞生長至80%~90%的密度時,適合進行傳代。
 
細胞計數:對細胞進行計數,以確定傳代時需要接種的細胞數量。
 
細胞離心:將細胞培養液進行離心,以沉淀細胞。離心速度和時間應根據細胞類型來確定。
 
培養基的更換:去除營養匱乏的舊培養液,用新的培養基代替??梢允褂脽o菌的吸管或移液器謹慎地進行操作,避免對細胞造成機械性損傷。
 
細胞接種:將沉淀的細胞重新懸浮在新的培養基中,并將其接種到新的培養器皿中。根據細胞類型和實驗要求,調整細胞密度和培養基的體積。接種后,輕輕搖晃培養器皿,使細胞均勻分布。
 
培養條件:將培養器皿放回恒溫培養箱中,并提供適當的培養條件,如溫度、濕度和CO2濃度。遵循細胞系的特定培養條件,以確保其正常生長和增殖。
 
細胞傳代培養注意事項
 
1.在吹打過程中,不要將移液管中的液體全部排出,同時要控制吹打節奏,以避免吹出泡沫。泡沫會對細胞造成損傷,并且難以在顯微鏡下觀察到是否所有細胞都被吹打下來。
 
2.不要等待貼壁細胞完全鋪滿培養皿或培養瓶,因為這可能會導致細胞生長緩慢或死亡。
 
3.對細胞進行消化時,最好不要等到細胞成片飄起,否則會影響細胞狀態,并且第二天培養中會出現較多的死細胞。

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