ELISA 試劑盒是蛋白定量檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。但是樣本的采集、處理及保存方法對(duì) ELISA 實(shí)驗(yàn)的成功有至關(guān)重要的作用。所以為了您ELISA 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確、順利的進(jìn)行，現(xiàn)利用我們公司在 ELISA 實(shí)驗(yàn)中積累的精益技術(shù)和豐富經(jīng)驗(yàn)，將在 ELISA 實(shí)驗(yàn)中遇到的常見(jiàn)樣本采集、處理、保存方法予以歸納、匯總，為您實(shí)驗(yàn)的成功打好基礎(chǔ)。另外，針對(duì)不同的檢測(cè)試劑盒或許有不同的樣本處理方法，請(qǐng)參照您所購(gòu)買(mǎi)試劑盒中的處理方法。特殊樣本的具體采集處理保存方法請(qǐng)參考研域生物上的文章或相關(guān)參考文獻(xiàn)。

常見(jiàn)樣本采集方法：

血清：全血在室溫自然凝固30分鐘后，1000g離心30分鐘，小心收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

血漿：根據(jù)試劑盒要求選擇合適的抗凝劑，與全血混合 20 分鐘后，1000g離心30分鐘，小心收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

細(xì)胞培養(yǎng)上清：將細(xì)胞培養(yǎng)液300 g離心10分鐘去除沉淀物，，仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

所有標(biāo)本收集完成后，應(yīng)及時(shí)分裝放在-20℃或-70℃條件下保存，避免反復(fù)凍融。如果在24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)，樣本可以存放在 2-8℃。在分析前，冷凍樣本應(yīng)該緩慢的恢復(fù)至室溫，輕柔地混勻。

注意事項(xiàng)：

(1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因此，在以 HRP 為標(biāo)記酶的ELISA 試劑盒測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與后面加入的 HRP 底物反應(yīng)顯色。

(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染。一則細(xì)菌所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

(3)血清樣本如果是以無(wú)菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下凍存。

(4)冰凍保存的血清樣本須注意避免反復(fù)凍融。樣本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力會(huì)對(duì)樣本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融樣本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。

(5)樣本保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。

以上是上海研域生物為您提供的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)樣本的處理方法及注意事項(xiàng)，望對(duì)您的科研事業(yè)提供幫助！