小鼠ELISA試劑盒樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，小鼠ELISA試劑盒應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。小鼠ELISA試劑盒用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可 將標本放于 -20 ℃保存，但 應 避免反復凍融 .

7.  不能檢測含NaN3的樣品 ，小鼠ELISA試劑盒因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠ELISA試劑盒操作步驟

標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100 μ l，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50 μ l，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100 μ l分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50 μ l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50 μ l棄掉，再各取50 μ l分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50 μ l分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50 μ l，混勻后從第七、第八孔中分別取50 μ l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50 μ l，混勻后從第九第十孔中各取50 μ l棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50 μ l，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L ）。

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、 待測樣品孔 。小鼠ELISA試劑盒在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 μ l，然后再加待測樣品10 μ l（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁， 輕輕 晃動 混勻 。