在獸用疫苗的生產過程中,尤其是細胞培養步驟中,很容易發生支原體污染,進而影響疫苗質量,會給疫苗生產商或養殖戶帶來經濟損失,同時也不利于畜禽疾病防控工作的順利開展。造成支原體污染的原因也較多,工作環境、培養基、被污染的細胞、試驗器材等都可能造成支原體的污染,從而使疫苗質量下降,安全性及免疫效果難以達到標準。
在日常的清潔與環境污染物監控過程中,應時刻關注支原體污染情況。
日常清潔中,應對實驗環境進行消殺,可采用消毒試劑,對試驗臺、地面、墻壁等表面進行擦拭,推薦使用支原體專用清除試劑——德國MB公司生產的Mycoplasma-off,即用型支原體祛除噴霧劑,直接將試劑噴灑在待清潔物表面即可,高效清除物體表面的支原體、真菌、細菌、等污染。
還應定期對培養物進行取樣檢測,監控培養物是否被支原體污染。PCR是一種很好的手段。根據支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物,對待檢樣本DNA進行擴增,通過對擴增產物的大小分析作出診斷。德國MB公司的支原體常規PCR檢測試劑盒,
①高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無交叉反應)。191bp為內控對照條帶,表明PCR反應正常。當樣本存在支原體污染時,由于內控對照與支原體DNA存在競爭,內控對照條帶變弱(例如支原體DNA>10^3拷貝)。
②高靈敏度,1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
③試劑盒含內控對照,可防止假陰性的發生。
④符合歐洲藥典要求。
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