qPCR檢測目前是分子檢測的黃金標準,但是它需要在實驗室里使用專業的設備和研究員進行操作。等溫聚合酶鏈反應,如環介導等溫擴增(LAMP)已經成為一種適用于POCT檢測的理想方法。
邁迪安的 Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 可凍干RT-LAMP一步法預混液是一個4x濃度的預混液,包含了優化的凍干輔料,適用于開發常溫穩定的檢測。在資源有限的條件下,冷鏈儲運是對POCT檢測的主要限制因素之一,常溫穩定的檢測具有的優勢包括減少冷鏈運輸的成本和延長產品保質期等。 邁迪安公司的Lyo-Ready™RT-LAMP 1-Step Mix可凍干RT-LAMP一步法預混液,使開發高靈敏、高性能的RT-LAMP檢測變得更容易,并且可以提供開發液體和干燥兩種類型檢測的靈活性。
和干燥兩種類型檢測的靈活性。
使用Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 可凍干RT-LAMP一步法預混液(橙色)和供應商N (藍色)分別對連續稀釋的登革熱2型樣本進行擴增,比較平均檢測時間TTR。結果表明,與供應商N相比,Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 的反應速度更快,TTR更早,并且重復性更高。
使用Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix(橙色)和供應商N(藍色)分別對含有不同濃度的 (A) UTM 和痰液,和(B)唾液,以1:10稀釋的粗裂解液樣本中擴增登革2型RNA。65°C反應60 min。TTR為熒光強度超過最大熒光值10%的閾值的時間。結果表明,與供應商N 相比,即使在有高濃度抑制物的UTM、痰和唾液中,Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix的平均TTR也更快,反應更靈敏。
試劑性能不受凍干和常溫儲存的影響。
通過LAMP反應分別對不含(綠色)和含有(藍色)10%UTM 和痰液 的RNA樣本使用PMSD4.1引物進行擴增,并且對比干燥后和新鮮配置的反應液在37℃保存3個月后的性能。TTR為熒光強度超過最大熒光值10%的閾值的時間。結果表明,在37℃的條件下,凍干過程不影響Lyo-Ready™RT-LAMP Mix的穩定性,因此可以推斷凍干后混合物的穩定性可達1年。
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