ELISA基于特異性抗原抗體反應,通常用到的是固相酶聯免疫吸附方法,這里以*使用的夾心法為例,其基本步驟為:
將包被抗體固定在微孔板表面
從板上洗去未被結合抗體
加入質控抗原或含有目標物的樣本
洗去其他雜蛋白,加入標記的檢抗
添加酶特異性底物,產生有色產物,使用酶標儀進行比色測定即可
辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶是ELISA中常用的酶,而底物包括四甲基聯苯胺(TMB)或2, 2'-疊氮基-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)。通常選擇重復或三次采樣,并且使用不同濃度的樣品以確保生物學上可接受的檢測范圍。
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