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小鼠ELISA檢測試劑盒實驗中血清樣本處理過程

來源:上海撫生實業有限公司   2024年01月02日 14:55  

    酶聯免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯yi烯等固相載體上,利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。它是應用最多的一種免疫酶技術。ELISA試劑盒(ELISAKits)已成為藥物和植物病理學研究中的常用診斷工具,是檢測組織提取液、血清和細胞培養液中目標抗體/抗原的理想工具,也是重要的質量控制手段。

   通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步,下面介紹一下血清樣本的處理方法。血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。

   用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清析出。(最好將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。

   采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。

ELISA 實驗中血清的采集、處理和保存:

1、真空采血針采集 2ml 新鮮血液,加入無菌試管中;

2、采血后室溫靜置 1 小時;

3、將采集血液用離心機 4℃,2500rpm 離心 10min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。

4、取上清。 分裝凍存備用,

2-8℃下,可放置保存 24-48 小時;

-20℃下,可放置保存 1 個月;

-70℃下,可放置保存 6 個月;

5、根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。

大部分 ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以 HRP 為標記的 ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。此外還應避免細菌污染,因為菌體中可能含有含有內源性 HRP,也會產生假陽性反應。血清標本宜在新鮮 時檢測。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,間接法 ELISA 中可使本底加深。


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