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正常人外周血白細(xì)胞的分離-自然沉降法
正常人外周血紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例約為6000～1000:1，兩類細(xì)胞的沉降速度不同，進(jìn)行正常人外周血白細(xì)胞分離。
1 、試劑及配制
1）無Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液。
2）含10%～20% 滅活小牛血清Hank’s液。
2 、操作方法
1）取靜脈血2ml，放入加有抗凝劑的試管中，輕輕混勻。
2）將試管直立靜置于室溫或37℃溫箱中30～60min，待紅細(xì)胞自然沉降。此時(shí)可見試管中的懸液分3層，上層為淡血漿，底層為紅細(xì)胞，在緊貼紅細(xì)胞層上有一呈灰白色的白細(xì)胞層（正常人外周血白細(xì)胞）。
3） 用毛細(xì)管吸取位于紅細(xì)胞層上面的富含白細(xì)胞的細(xì)胞懸液，移入另一試管中；
4） 加入無Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液至離試管口3cm處，混勻，以水平離心機(jī)2000r/min 離心10min，棄上清，同法在洗滌兩次。
5）沉淀細(xì)胞用適量10%～20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸，計(jì)數(shù)，配成所需的細(xì)胞濃度的懸液，一般常用2×106 /min。
正常人外周血白細(xì)胞的分離-自然沉降法
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