手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
免疫熒光技術是一種建立在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎之上的先進技術。它基于抗原抗體反應的原理，首先將已知的抗原或抗體標記上熒光標簽，然后使用這些熒光標記的抗體（或抗原）作為探針，用來探查細胞或組織中的相應抗原（或抗體）。通過熒光顯微鏡，可以清晰可見熒光信號在細胞或組織中的位置，從而確定抗原或抗體的性質、分布以及通過定量技術（例如流式細胞儀）來測定其含量。這項技術為科學研究和醫學診斷提供了強大的工具，使我們能夠深入了解生物分子的相互作用和細胞內過程。那么你知道免疫熒光實驗的流程有什么嗎？讓我們一起來看看吧！
免疫熒光實驗的主要步驟包括細胞片制備、固定及通透（或稱為透化）、封閉、抗體孵育及熒光檢測等。
一、細胞片制備（通俗的說法是細胞爬片）
免疫熒光實驗的第一步是準備細胞片，而細胞片的質量對整個實驗的成功起著至關重要的作用。這是因為，如果在細胞片制備過程中發生細胞掉落或損壞，那么實驗將無法繼續進行。這一步的關鍵在于精細處理玻片（Slides或Coverslips）并確保細胞保持活力。只有在這一步驟中細致入微地處理好細胞片，才能為后續的免疫熒光實驗奠定堅實的基礎。
具體操作步驟：
細胞準備。對單層生長細胞，在傳代培養時，將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次；對懸浮生長細胞，取對數生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。
二、固定和通透
最關鍵的是，必須根據研究對象的抗原性質，明智地選擇適用的固定方法。選用正確的固定劑和遵循適當的固定程序，對于獲得出色的實驗結果至關重要。這是確保實驗成功的重要一環，因為固定是為了保持抗原的完整性，使其能夠被有效地檢測和分析。
具體操作步驟：
固定：根據需要選擇適當的固定劑固定細胞。固定完畢后的細胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5 min。
通透：使用交聯劑（如多聚甲醛）固定后的細胞，一般需要在加入抗體孵育前，對細胞進行通透處理，以保證抗體能夠到達抗原部位。選擇通透劑應充分考慮抗原蛋白的性質。通透的時間一般在5-15min.通透后用PBS洗滌3×5 min。
三、封閉和抗體孵育
與其他方法（例如ELISA或Western Blot）的許多步驟相似，免疫熒光實驗的主要區別在于其使用了熒光標記的抗體。因此，在進行該實驗時，必須特別注意避光操作，以保持熒光信號的穩定性。此外，抗體濃度的選擇在免疫熒光實驗中可能具有更加關鍵的意義，因為它會直接影響到實驗結果的質量和解釋。
具體操作步驟：
封閉：使用封閉液對細胞進行封閉，時間一般為30min。
一抗結合：室溫孵育1h或者4℃過夜。PBST漂洗3次，每次沖洗5min。
二抗結合：間接免疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h.PBST漂洗3次，每次沖洗5min后，再用蒸餾水漂洗一次。
四、熒光檢測
最后需要注意的是，標記好熒光的細胞片應盡早觀察，或者用封片劑封片后在4℃或-20℃避光保存，以免因標記蛋白解離或熒光減弱而影響實驗結果。
具體操作步驟：
封片及檢測：滴加封片劑一滴，封片，熒光顯微鏡檢查。
更多有關免疫熒光實驗的流程，請聯系北京百奧創新科技有限公司。
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心