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微生物培養基滅菌方法合集

來源:上海邦景實業有限公司   2024年04月01日 13:20  

        培養基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料,一般都含有水、氮源、無機鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等)等。 

       培養基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內。由于液體培養基不易長期保管,均改制成粉末。培養基由于富含營養物質,易被污染或變質。配好后不宜久置,最好現配現用。培養基配成后一般需測試并調節pH,還須進行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。

        滅菌(sterilization)是指用物理或化學的方法殺滅全部微生物,包括致病和非致病微生物以及芽孢,使之達到無菌保障水平。經過滅菌處理后,未被污染的物品,稱無菌物品。經過滅菌處理后,未被污染的區域,稱為無菌區域。


      在發酵過程中,培養基滅菌主要有以下幾個原因:如不滅菌,會使生物反應的基質或產物,因雜菌的消耗而損失,造成能力的下降;雜菌也會產生代謝產物,這就使產物的提取加困難,造成得率降低,產品質量下降;雜菌大量繁殖后,會改變反應液的pH值,使反應異常;有些雜菌會分解產物,使失敗;如果發生噬菌體污染,菌細胞將被裂解,使失敗。常見的五種滅菌方法如下:

一、化學物質滅菌

??原理:藥物與微生物細胞中的成分反應,使蛋白質變性酶失活。使用范圍:器皿、雙手和實驗室、無菌室的環境滅菌,不能用于培養基滅菌。

??常用的滅菌劑:甲醛 37%??戊二醛 2%??高錳酸鉀 0.1%-0.25% ??苯酚 0.1%-0.15%

??漂 5% ??過氧乙酸 0.02%-0.2%??酒精 75% ??焦碳酸二乙酯 0.01%-0.1%??煤酚皂(來蘇爾) 1%—5%

二、干熱滅菌

??滅菌原理是利用高溫對微生物有氧化、蛋白質變性和電解質濃縮作用而殺滅微生物。常用灼燒和電熱箱加熱,140-180℃ 1-2小時。適于對玻璃及金屬用具及沙土管滅菌。

 

三、濕熱滅菌

??滅菌原理是直接用蒸汽滅菌,蒸汽在冷凝時能釋放出大量潛熱,蒸汽具有強大的穿透力,破壞菌體蛋白和核酸的化學鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡。水煮常壓滅菌:100℃。或飽和蒸汽滅菌:一般121℃,30分鐘。適合培養基和發酵設備滅菌。

 

四、輻射滅菌

??輻射滅菌的原理是利用高能量的電磁輻射與菌體核酸的光化學反應造成菌體死亡。常用的有紫外線、X射線和γ射線。用于室內空氣及器皿表面滅菌。

 

五、過濾除菌

??除菌原理是利用微生物不能透過濾膜除菌。方法是使用0.01~0.45 mm孔徑濾膜,用于壓縮空氣、酶溶液及其他不耐熱化合物溶液除菌。

??在工業中,對于培養基、管道、設備的滅菌,通常采用蒸汽加熱到一定的溫度,并保溫一段時間的滅菌方法,稱之為濕熱滅菌。濕熱滅菌的顯著優點是:使用方便,無污染,而且其冷凝水可以直接冷凝在培養基中,也可以通過管道排出。

培養基滅菌大多數用濕熱滅菌。衡量熱滅菌的指標很多,常用的是“熱死時間",即在限定的溫度下殺死原有微生物中一定比例所需的持續時間。影響熱滅菌的溫度和時間的因素很多,包括:微生物種類、性質、濃度和培養基的性質、濃度等。


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