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酶標儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結構和光電比色計基本相同。光源燈發出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔板中的待測標本。該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號，電信號經前置放大，對數放大，模數轉換等信號處理后送入微處理器進行數據處理和計算，最后由顯示器和打印機顯示結果。
光是電磁波，波長100nm-400nm稱為紫外光，400nm-780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收了光中的紅色光譜。酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。
酶標儀，即酶聯免疫檢測儀，用來檢測ELISA反應后的吸光度值，主要由光路系統與信號采集系統組成。工作原理為：
光源燈發出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光，該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上；
分為濾光片式酶標儀(固定波長酶標儀)、光柵式酶標儀(全波長酶標儀)，這兩種都是屬于光吸收酶標儀；
濾光片是光學玻璃片鍍制光學膜層，使濾光片對通過的波長發生變化，將不需要的波長光隔開。根據選配的濾光片，只能截取特定波長進行檢測。
光柵：就光柵分光后的一點而言，光是純的，但由于透光孔具有一定寬度，比色皿所接受的光，是一個在波長附近波段上的等強的光。
濾光片：經濾光片分光后，通過透光孔被比色皿所接受的光也是一個波段，但在波長上光的強度最高，呈正態分布。
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