DNA限止性內切酶克化注意事情要點

1 .凡用在酶切反響中的一切分子化合物塑料盛器（Eppendorf 管,Tip 頭等）,真空干燥箱都要新的,zui終用重蒸水清洗,濕熱滅菌,置 50 ℃溫箱中烘焙,運用前敞開包裝,用小鑷子夾取,不直接用手去拿,嚴密防備手里雜酶污染。

2 .分子克隆是微量操作技術,DNA 樣品與限止性內切酶的用量都,務必嚴明注意吸樣量的正確性及所有放入反響整體體系中電熱恒溫培養箱。

3 .要注意酶切時加樣的次第,普通次第為水、緩和沖突液、DNA 各項試藥,zui終才加酶液。取液時,Tip 頭要從溶液外表汲取,以避免 Tip 頭沾去過多的液體與酶,待用的內切酶要放在冰浴內,用后蓋緊蓋子,迅即放回 -20 ℃冰箱,避免限止性內切酶的失活 培養箱。

4 .當樣品在 37 ℃與 65 ℃保暖時,要注意:

（l ）避免因蓋子未蓋嚴緊使水汽進入了管內,使反響溶液大小數量多增加,導致實驗敗績。

（2 ）避免因為標簽剝離,分不zui后校樣種類型。

5 .因為溫差端由,往往在蓋上有水汽,因為這個樣品酶切完結或半中腰抽樣電泳要離心 2 秒鐘,以集中大小內溶液,否則會發覺酶切后大小 少了。