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霉菌毒素是由真菌產(chǎn)生的有毒的次級代謝產(chǎn)物，其可以通過飼料或食品進入到人和動物體內(nèi)，從而引起急性或慢性中毒，危害人類和動物健康。霉菌的生長與地域、氣候、季節(jié)等密切相關(guān)，因此不同地區(qū)、時間、季節(jié)的飼料和飼料原料受霉菌毒素污染的情況也有所不同。
目前關(guān)于霉菌毒素的檢測方法主要有：薄層色譜法(TLC)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)、氣相色譜法(GC)和高效液相色譜法(HPLC)等。由于TLC和ELISA方法不能準(zhǔn)確定量，GC方法雖然檢測靈敏度高，但樣品前處理復(fù)雜，雜質(zhì)干擾大。目前對霉菌毒素的檢測用HPLC法比較認可，用免疫親和柱對經(jīng)過萃取的樣品進行凈化后，雜質(zhì)少，檢測限低。經(jīng)試驗摸索研究，建立了免疫親和柱-高效液相色譜檢測的方法，該方法靈敏度高、回收率高、重復(fù)性好。本研究的目的是利用免疫親和柱-高效液相色譜法調(diào)查中國各個地區(qū)飼料及原料中AFB1、ZEN和DON的污染情況，為飼料生產(chǎn)企業(yè)和養(yǎng)殖者提供參考。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
高效液相色譜儀(SHIMADZU LC-20AT)；熒光檢測器(SHIMADZU RF-20A)；色譜柱為cloversil C18色譜柱，5μm，4.6mm×150mm；色譜工作站(島津高效液相色譜LC工作站)；AFB1、ZEN和DON免疫親和柱，由北京中檢維康技術(shù)有限公司生產(chǎn)。具體操作步驟參考中檢維康公司霉菌毒素檢測的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。
1.2 試驗方法
1.2.1 樣品采集
1.2.2 試樣的制備與提取
試樣制備與提取的具體操作步驟參考中檢維康公司免疫親和柱的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。
1.2.3 毒素的檢測
使用免疫親和柱-高相液相色譜法對樣品中的AFB1、ZEN和DON進行檢測。黃曲霉毒素檢測方法參照GB/T 30955-2014《飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》中的測定方法，并根據(jù)試驗情況進行適當(dāng)調(diào)整；玉米赤霉烯酮檢測方法參照GB/T 28716-2012《飼料中玉米赤霉烯酮的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》中的測定方法，并根據(jù)試驗情況進行適當(dāng)調(diào)整；嘔吐毒素檢測方法參照GB/T 30956-2014《飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》中的測定方法，并根據(jù)試驗情況進行適當(dāng)調(diào)整。
2 結(jié)果與分析
按照飼料樣品中AFB1、ZEN和DON含量高于檢出限作為檢出，本研究中陽性樣品設(shè)定檢出限值如下：AFB1 0.5μg/kg、ZEN 1μg/kg和DON 10μg/kg。飼料和原料中AFB1、ZEN和DON允許參照我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 13078-2017《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》執(zhí)行。
2.1 所有樣品總體情況
飼料樣品中4種霉菌毒素均存在超標(biāo)現(xiàn)象，且樣品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮的陽性檢出率高于2020年；
植物性原料中4種霉菌毒素均存在超標(biāo)現(xiàn)象，且樣品中玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的最高值高于2020年；
粕類、麩類樣品中玉米赤霉烯酮、T-2毒素和嘔吐毒素均存在超標(biāo)現(xiàn)象；
玉米副產(chǎn)物中4種霉菌毒素均存在超標(biāo)現(xiàn)象，且樣品中玉米赤霉烯酮的最高值高于2020年；玉米樣品中赤霉烯酮和嘔吐毒素污染較嚴重。
此外，多種毒素共存現(xiàn)象明顯，霉菌毒素的共同污染可以產(chǎn)生累加和協(xié)同的毒性作用；在這項研究中，樣品中霉菌毒素共同污染非常普遍，超過 95% 的樣品含有2 種或更多的霉菌毒素。
總之，我國飼料及原料中霉菌毒素污染仍處于一個較危險的水平，必須加強對各類霉菌毒素的檢測和長期監(jiān)控，這對更有力地保障畜禽養(yǎng)殖發(fā)展和食品安全非常必要。
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