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多個研究領域依賴于稀有細胞的分離，例如從人血中分離循環腫瘤細胞 ( CTCs )、從母體樣本中分離胎兒細胞，或在分離低豐度的GFP陽性轉染細胞。在這些情況下，傳統流式細胞分選儀的高系統壓力 ( >20psi ) 會對損害目標細胞的完整性和活性。高死體積會造成樣本損失，稀有細胞的數量本身就非常有限，這無疑是雪上加霜。此外，高度專業化的設備和技術人員，增加了操作的成本和復雜性。
單細胞柔性分選系統Pala基于微流控技術，流式細胞術和液滴分配技術。可在幾分鐘內將單個細胞分選并分離到96或384孔板中。低系統壓力 (<2psi ) 可確保輕柔分選，并保持細胞活力和完整性。為單細胞分選和分離提供了快速、簡單的解決方案。
01. 實驗步驟
> 稀有細胞富集
將HEK-293細胞以0.002%的比例混入到無熒光SP2/0細胞中 ( 2.8μL HEK-293細胞加入到500uL SP2/0中) 制備模擬稀有細胞群。在此細胞群中，預計有10個FITC信號值大于100的HEK-293細胞。進行富集時，利用FITC通道作為觸發器，觸發值為100。其它設門參數參照各組的分析數據。
96孔板A1孔預先加入150μL培養基進行富集細胞收集。在富集過程中，將1μL的一滴液滴到載玻片上，在顯微鏡下檢測陽性細胞的比例，發現一滴中總共含有10個細胞，其中一個呈GFP陽性。將富集后A1孔中樣品 ( 少于200μL ) 轉移至新芯片中，用100μL培養基清洗兩遍A1孔，并將清洗液同樣轉移至新芯片中。
> 對富集后稀有細胞分離
利用單細胞分選模式分選單個熒光細胞，將前向散射光 ( FSC ) 通道作為激發器，激發水平為FSC50。為排除芯片之間的微小差別，將FITC下限設為90而不是之前的100，其它設門數據參照之前的設置。單個GFP陽性細胞分布到預加150μL培養基的96孔板中。單個細胞利用顯微鏡進行驗證，克隆培養14天。
02. 實驗結果
（1）模擬稀有細胞樣本包含500,000個SP2/0細胞和僅有10個GFP陽性HEK-293細胞 ( 0.002% ）。富集后，目標群體在分離池中的頻率為10%，增加了5000倍。
（2）通過明場和熒光顯微鏡檢查，確認從富集中恢復了7個GFP陽性HEK-293細胞，富集效率為70%。
（3）在單細胞分離后，96孔板中識別出7個中的4個GFP陽性HEK-293細胞，單細胞分離效率為40%。14天的單細胞擴增確認了GFP陽性細胞的克隆增殖。
03. 單細胞柔性分選系統Pala的優勢
（1）溫和的操作條件：在低壓環境下操作 (＜2psi )，這有助于保護細胞的完整性和活性，避免因高壓造成的細胞損傷。
（2）靈活的分離模式：單細胞分離模式，富集分離模式，大量細胞分離模式，滿足不同應用需求。
（3）高效的分離速度：僅需1min即可完成將單細胞分離至96孔板中，6min可實現分離至384孔板。
（4）極低的死體積：近乎零的死體積，這有助于最大限度地減少樣本損失，特別是在處理稀有或珍貴的細胞樣本。
（5）適用于小樣本量：即使從很少的細胞開始 ( 如100個細胞 )，單細胞分配器也能夠進行有效的分離和分配。
總之，單細胞柔性分選系統Pala的兩步法實現稀有細胞分離，為傳統細胞分選儀器提供了一種經濟高效的替代方案，這種低壓系統保留了分離細胞的完整性和活性，利于分離的克隆細胞健壯生長。
* 本文轉載自「ProteinSimple」微信公眾號
關于ProteinSimple：
美國納斯達克上市公司Bio-techne (Nasdaq: TECH) 集團旗下的蛋白質分析品牌，一直致力于研發和生產更精準、更快速、更靈敏的創新性蛋白質分析工具，包括蛋白質電荷表征、蛋白質純度分析、蛋白質翻譯后修飾定量檢測、蛋白質免疫實驗如 Western 和 ELISA 定量檢測蛋白質表達等技術，幫助生物制藥、細胞治療、生物醫學和生命科學等領域科學家解決蛋白質分析問題，深度解析蛋白質和疾病相互關系。
關于上海昊擴：
上海昊擴科學器材有限公司成立于2019年，總部位于上海，是一家實驗室設備/耗材及分析儀器的專業服務商。公司致力于為生物、醫藥、物性檢測、化工分析、食品、工業生產等相關領域客戶提供國內外高科技專業設備以及技術咨詢服務。2024年，上海昊擴已正式與美國Bio-techne集團旗下的蛋白質分析品牌ProteinSimple達成合作，成為其華東大區授權代理商。
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