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        Blasticidin S 殺稻瘟菌素S(滅瘟素) 的應用

        來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2024年09月07日 22:29  

        殺稻瘟菌素S的作用原理


        殺稻瘟菌素S(Blasticidin S)是一種從灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)中提取的核苷類抗生素,主要通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核細胞的蛋白質合成。其具體作用機制包括阻斷釋放因子誘導的肽基-tRNA水解,并增強tRNA與核糖體大亞基的結合,從而在一定程度上抑制肽鍵的形成。

         

        殺稻瘟菌素S具有快速而強效的作用模式,很低的抗生素濃度便能導致細胞迅速死亡。它不僅對細菌和真核生物中的蛋白質合成有顯著抑制作用,還對真菌、線蟲和腫瘤細胞也具有活性。殺稻瘟菌素S常用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉染細胞。

         

        殺稻瘟菌素S的應用

        01
        細胞培養與篩選

        哺乳動物細胞:殺稻瘟菌素S常用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉染細胞。這些抗性基因分別來自蠟樣芽孢桿菌和土曲霉,能夠將殺稻瘟菌素轉化為無毒的衍生物,從而實現對未攜帶抗性基因細胞的選擇性殺死,哺乳動物細胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/mL。

        細胞

        種屬

        組織

        培養基

        Blasticidin S濃度 (μg/mL)

        HeLa

        人類子宮細胞

        Human

        Uterus

        DMEM

        3-10

        HEK293

        人類胚胎腎細胞

        Human

        Kidney

        DMEM

        3-10

        B16

        小鼠黑色素瘤細胞

        Mouse

        Melanoma

        RPMI

        3-10

        PC1.0

        敘利亞倉鼠腺癌細胞

        Hamster

        Adenocarcinoma

        RPMI

        10-30

        CHO

        中國倉鼠卵巢細胞

        Hamster

        Ovary

        DMEM

        5-15

         

        細菌選擇:在細菌培養中,推薦使用濃度為25-100 µg/mL,可以迅速導致未攜帶抗性基因的細胞死亡。

        E. coli對Blasticidin S的敏感性稍差,但是轉化子對Blasticidin S具有耐受性,可以用低鹽LB培養基(pH 8)進行篩選,濃度范圍為50-100 μg/mL Blasticidin S,高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

         

        植物細胞:同樣適用于植物細胞的基因轉移實驗,常用bsr和BSD作為篩選標志。

         

        02
        研究蛋白質合成

        殺稻瘟菌素S被用于研究肽鍵形成水平上的蛋白質合成過程,特別是在TLR-2構建體的HEK293-T細胞和HEK-D5細胞中的應用。

         

        03
        抗真菌特性

        它還具有一定的抗真菌活性,可用于預防和治療稻瘟病。其殺菌作用主要是影響蛋白質的合成,并且能夠抑制孢子萌發、菌絲發育和孢子形成。

         

        04
        其他應用

        殺稻瘟菌素S也被用于研究腫瘤細胞的抑制效果。
        它還可以作為含有抗性基因bls、bsr或BSD的轉化細胞的選擇劑

         

         

        稻瘟菌素S的相關實驗步驟(哺乳動物穩轉株篩選)

        1)Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/mL。攜帶bsr或BSD基因的質粒轉染到細胞中,在含有Blasticidin S的正常生長培養基中孵育,用于篩選穩定轉染細胞株。

        2)轉染后48 h,用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養基將細胞傳代(注:細胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細胞密度太高,抗生素效率降低。細胞分盤時覆蓋率最好不超過25%)。

        3)每3-4天去除培養基,加入含抗生素的新鮮培養基。

        4)7天后檢測細胞集落形成。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率,集落形成可能需要增加一周或更久。

        5)轉移5-10個耐受克隆到35 mm細胞盤中,加入選擇培養基維持培養7天。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。 

         

         

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        產品名稱

        產品編號

        規格

        外觀

        價格(元)

        Blasticidin S

        殺稻瘟菌素S

        滅瘟素

        CAS:3513-03-9

        60218ES10

        10 mg

        液體(濃度為10 mg/mL,in HEPES緩沖液,pH 7.5)

        688

        60218ES50

        5×10 mg

        2446

        60218ES60

        10×10 mg

        4483

        60218ES80

        1 g

        粉末(使用時可用無菌水或者緩沖液配制成5-10 mg/mL的儲存液)

        22595

         

         

        01
        穩轉細胞株篩選用抗生素

        產品名稱

        產品貨號

        規格

        價格(元)

        Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素鹽酸鹽

        60210ES25/60

        25 /100 mg

        678/2028

        鹽酸博萊霉素

        60216ES60/80

        100/10×100 mg

        453/3353

        Phleomycin (20mg/ml in solution) 腐草霉素

        60217ES20/60

        20/5×20 mg

        868/3268

        Blasticidin S (10mg/ml in Solution)

        殺稻瘟菌素S (滅瘟素)

        60218ES10/50/60/80

        10/5×10/10×10 mg/1 g

        688/2446/4483/22595

        G418 Sulfate (Geneticin) 遺傳霉素

        60220ES03/08

        1/5 g

        358/1480

        Hygromycin B (50 mg/ml) 潮霉素B

        50 mg/ml)

        60224ES03

        1 g (20 ml)

        849

        Hygromycin B 潮霉素B

        60225ES03/10

        1/10 g

        719 /6599

        金擔子素A(AbA)

        60231ES03/08

        1/5×1 mg

        1366/4266

         

        02
        穩轉細胞株篩選用抗生素

        產品名稱

        產品貨號

        規格

        價格(元)

        Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture 細胞培養用青霉素-鏈霉素(雙抗)

        60162ES76

        100 mL

        158

        環丙沙星鹽酸鹽

        60201ES25/60

        25/100 g

        198/588

        Carbenicillin, Disodium Salt

        60202ES08/25

        5/25 g

        358/1428

        Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青霉素鈉

        60203ES10/60

        10/100 g

        108/968

        Doxycycline hyclate 鹽酸強力霉素

        60204ES03/08

        1/5 g

        106/445

        Chloramphenicol, USP Grade 氯霉素,USP級

        60205ES08/25

        5/25 g

        48/208

        Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素

        60206ES10/60

        10/100 g

        169/1436

        Neomycin Sulfate 硫酸新霉素

        60207ES25/60

        25/100 g

        148/488

        Penicillin G, Sodium Salt ?青霉素G鈉鹽

        60208ES25/60

        25/100 g

        289/1049

        Streptomycin Sulfate 硫酸鏈霉素

        60211ES25/60

        25/100 g

        119/339

        Tetracyclin HCl 四環素鹽酸鹽(USP)

        60212ES25/60

        25/100 g

        168/678

        Vancomycin Hydrochloride 鹽酸萬古霉素

        60213ES60/80

        100 mg/1 g

        287/677

        Gentamycin Sulfate Salt ?硫酸慶大霉素

        60214ES03/08

        1/5 g

        349/1150

        Spectinomycin Hydrochloride 鹽酸壯觀霉素

        60215ES08

        5 g

        479

        Cefotaxime Sodium Salt 噻孢霉素鈉鹽

        60226ES03/08

        1/5 g

        102/325

        Rifampicin 利福平

        60234ES03/08

        1/5 g

        159/579

        Amphotericin B 兩性霉素B

        60238ES01/03

        100 mg/1 g

        479/3349

         

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