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RAW 264.7-LUC是一種常用的小鼠單核巨噬細胞白血病細胞系，廣泛應用于免疫學、藥理學和腫瘤學等領域的研究。該細胞系具有較高的增殖能力和穩定的遺傳特性，是研究巨噬細胞功能和藥物篩選的理想模型。本文將詳細介紹RAW 264.7-LUC細胞的培養與鑒定方法。
一、細胞培養
培養基的選擇：
RAW 264.7-LUC細胞通常在DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培養基中生長。培養基中需添加10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素-鏈霉素溶液，以提供必要的營養和防止細菌污染。
細胞傳代：
細胞傳代是維持細胞生長的重要步驟。當細胞密度達到80%-90%時，需進行傳代。首先，棄去舊培養基，用PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌細胞一次，然后加入適量的胰蛋白酶溶液，輕輕搖晃培養瓶，使細胞脫離瓶壁。待細胞懸浮后，加入新鮮培養基終止消化，將細胞懸液轉移至新的培養瓶中，繼續培養。
培養條件：
RAW 264.7-LUC細胞應在37°C、5%CO2的恒溫培養箱中培養。CO2濃度的維持有助于穩定培養基的pH值，促進細胞生長。
二、細胞鑒定
顯微鏡觀察：
使用倒置顯微鏡觀察細胞形態和生長狀態。健康的細胞呈圓形或不規則形狀，細胞質豐富，胞核清晰可見。若發現細胞變圓、浮起或出現大量碎片，則可能表明細胞狀態不佳或受到污染。
細胞活力測定：
細胞活力測定是評估細胞健康狀況的重要方法。常用的測定方法包括MTT法和Trypan Blue染色法。MTT法通過檢測細胞內線粒體的還原能力來評估細胞活力；Trypan Blue染色法則通過染色死細胞，計算活細胞比例。
流式細胞術分析：
流式細胞術是一種高通量的細胞分析技術，可用于檢測細胞表面標志物、細胞周期和凋亡等。通過對細胞進行熒光染色，結合流式細胞儀檢測，可以獲取詳細的細胞信息。
基因表達分析：
通過實時熒光定量PCR(qRT-PCR)或Western Blot等方法，檢測細胞中特定基因的表達水平，進一步確認細胞的特性和功能狀態。
三、注意事項
無菌操作：
在細胞培養過程中，必須嚴格遵守無菌操作原則，避免細菌和真菌污染。所有操作應在超凈工作臺中進行，操作前需用75%酒精對手和器具進行消毒。
試劑質量：
細胞培養所用試劑和耗材應為高質量的生物制品，避免因試劑質量問題影響細胞生長和實驗結果。
定期檢測：
定期檢測細胞生長狀態和活力，及時發現并處理問題。建議每兩周進行一次Mycoplasma檢測，以防支原體污染。
RAW 264.7-LUC細胞作為一種重要的實驗模型，其培養與鑒定方法的掌握對于相關領域的研究具有重要意義。通過合理的培養條件和嚴格的鑒定方法，可以確保細胞的穩定生長和實驗結果的可靠性。
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