細胞凍存是細胞培養中的關鍵環節，直接影響細胞存活率和活力，關系到后續細胞實驗能否按照計劃有效地進行。掌握好細胞凍存的小Tips，有助您做好細胞培養式樣，讓我們一起來看看吧！

一、細胞凍存的基本原則

細胞凍存遵循“慢凍”原則：讓細胞在超低溫環境中緩慢進入“冬眠”狀態，暫時停止其代謝活動。目的是保存細胞樣本，方便復蘇。

二、細胞凍存的注意事項

1. 溫度控制不穩定可能導致細胞存活率降低

二甲基亞砜（DMSO）或甘油常作為冷凍保護劑，保護細胞。DMSO能快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點，延緩凍存過程，同時增加細胞膜的通透性，提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成，從而達到保護細胞的目的。

2. 使用程序降溫盒的注意事項

（1）異丙醇的量必須足夠，且使用5次后需要更換，以確保凍存效果。而泡沫程序降溫盒需要在恢復到室溫后使用。對于短期的細胞凍存，可以考慮使用-80℃的超低溫冰箱。

（2）盡量選擇對數生長期的細胞進行凍存，此時的細胞匯合度應達到80%以上。這樣可以大大提高細胞復蘇后的存活率。對于嬌貴的細胞，我們可以通過適當提高凍存液中血清的比例來保證獲得更高的存活率和細胞活力。

（3）細胞凍存密度不能太低，因為在細胞凍存時會損失部分細胞，所以適當提高細胞密度有助于提高細胞復蘇存活率。

（4）細胞凍存液需要提前配制。在配制細胞凍存液時（或直接使用商業的細胞凍存液，如wako的無血清細胞凍存液302-14681），由于DMSO溶解在培養基中會釋放大量熱量，因此細胞凍存液需要提前配制，切忌直接將DMSO加入含有細胞的培養基中，以避免損傷細胞。

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