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確保PCR實驗成功的關鍵:PCR管的選用與維護

來源:深圳艾維迪泰生物科技有限公司   2024年10月11日 10:50  
  聚合酶鏈式反應(PCR)是現代分子生物學中的一項核心技術,它能夠在短時間內大量擴增特定的DNA片段。而PCR管作為這一過程中的關鍵工具,其選用與維護直接關系到實驗的成敗。以下將詳細探討如何正確選用和維護PCR管,以確保PCR實驗的順利進行。
 
  一、PCR管的選用
 
  類型選擇
 
  單管:適合單個或少量樣本的檢測。
 
  8聯管與連蓋8聯管:8聯管是常用的類型,一排有8個反應空間,能夠靈活調整總數,操作便利。連蓋8聯管則每個管上都有獨立的管蓋,可按需選擇,避免操作污染,方便加樣。
 
  12聯管:一排有12個反應空間,操作靈活,性價比優于8聯管。
 
  體積選擇
 
  PCR管的體積主要分為0.1ml和0.2ml。具體使用哪種體積的管,需根據PCR儀設備來確定。0.1ml的PCR管比0.2ml的矮,若適配0.2ml PCR管的熒光PCR儀選擇0.1ml的PCR管,可能導致設備熱蓋無法壓住PCR管蓋,運行過程中管蓋崩開,試劑蒸發,形成氣溶膠污染。相反,適配0.1ml PCR管的熒光PCR儀使用0.2ml的PCR管,可能損壞PCR儀。
 
  材質與密封性
 
  PCR管通常由耐高溫的塑料材料(如聚丙烯PP或聚對苯二甲酸乙二酯PET)制成,具有光滑透明、無毒無味的特點。蓋子則一般采用硅膠材料制成,以保持管內樣品的高度密封性。
 
  應選擇來自可靠廠家的PCR管,如有必要,可以要求提供質量檢驗報告。
 
  顏色選擇
 
  PCR管的管體顏色分為透明、磨砂和白色。在熒光定量PCR實驗中,與透明管體相比,磨砂與白色管體因透光率降低,熒光損失減少,使更多信號被反射回熒光檢測模塊,增加信噪比。但需注意,不同品牌的熒光定量PCR儀適配不同顏色管體的PCR管。
 
  二、PCR管的維護
 
  預處理
 
  在使用前,可以對PCR管進行預處理,如在高溫下進行滅菌處理,去除可能存在的污染物。
 
  正確裝載
 
  在裝載樣本和試劑時,確保每個孔位的液體量均勻一致,避免因液體量不均導致的實驗誤差。
 
  避免交叉污染
 
  在操作過程中,注意避免不同樣本之間的交叉污染。使用一次性手套和干凈的移液器吸頭,確保實驗的準確性。
 
  及時清洗
 
  在使用后,及時清洗PCR管,去除殘留的試劑和樣本??梢允褂脤S玫腜CR管清洗液,按照說明書進行操作。對于頑固污漬,可以使用超聲波清洗機進行清洗。
 
  干燥處理
 
  清洗后的PCR管需要進行干燥處理。可以使用離心機進行離心干燥,或者自然晾干。避免使用熱風槍等高溫設備,以免損壞PCR管。
 
  檢查與篩選
 
  在干燥后,仔細檢查PCR管的完整性,剔除破損或變形的管子,確保其密封性和完整性。
 
  正確存儲
 
  將清洗并干燥后的PCR管存放在干燥、陰涼的環境中,避免高溫和陽光直射,以延長其使用壽命。
 
  綜上所述,正確選用和維護PCR管是確保PCR實驗成功的關鍵。通過選擇合適的類型、體積、材質和顏色,以及進行預處理、正確裝載、及時清洗、干燥處理、檢查篩選和正確存儲等維護措施,可以有效提高PCR實驗的準確性和成功率。

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