Hypoxyprobe™-1 Pacific Blue Kit 組件詳細說明：

Hypoxyprobe™-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學名稱為鹽酸匹莫噻唑，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116 mg/ml）；在324 nm處的紫外吸收（在0.9%鹽水中的消光系數為7020）。自由堿形式的匹莫噻唑分子量為254.3，pKa為8.7，辛醇-水分配系數為8.5。固體Hypoxyprobe™-1在低光照條件下的室溫存儲兩年，并在4°C下以0.9%鹽水（100 g/liter）存放4.5年，沒有檢測到降解（UV和HPLC分析）。匹莫噻唑在缺氧細胞中被還原活化，并與含硫（巰基）基團形成穩定的加合物，這些基團存在于蛋白質、肽和氨基酸中。太平洋藍染料-MAb1與這些加合物結合，允許通過免疫化學手段檢測它們。

Pacific Blue-MAb1是一種染料結合的大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆4.3.11.3），以0.5 mg/ml的濃度提供，溶于含1% BSA和0.09%疊D化鈉作為穩定劑的PBS中。感興趣的組織可以通過免疫組化在冷凍固定切片或福爾馬林固定石蠟包埋切片上研究，或者在組織解離后進行流式細胞術。注意：太平洋藍染料-MAb1與匹莫噻唑的蛋白質、肽和氨基酸加合物結合，但在免疫組化過程中，組織處理會沖洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫組化缺氧檢測依賴于缺氧組織中匹莫噻唑的蛋白質加合物。

艾美捷Pacific Blue：

貨號：HPB-Pacific Blue

應用：免疫化學檢測細胞和組織缺氧，包括免疫熒光、免疫過氧化酶法或流式細胞術。該Hypoxyprobe™-1 Pacific Blue試劑盒在福爾馬林固定的石蠟包埋大鼠腫瘤組織中提供強烈的免疫染色，并且背景非常低。

規格：

a. Hypoxyprobe™-1 Pacific Blue試劑盒包含100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe™-1（匹莫噻唑鹽酸鹽）。通常，動物研究中使用的劑量為60 mg/kg體重。

b. 一小瓶（100 mg和200 mg試劑盒）或兩小瓶（1000 mg試劑盒）含有200微升稀釋的Pacific Blue染料結合的IgG1大鼠單克隆抗體（克隆11.23.22.R）。每小瓶包含200微升0.50 mg/ml的Pacific Blue染料-MAb1溶液，稀釋液為含1% BSA和0.09%疊D化鈉的PBS。Pacific Blue染料-MAb1的最佳稀釋度需由研究人員確定，但發現1:50-100的稀釋度能在大鼠腫瘤組織中產生強烈的免疫熒光染色。Pacific Blue染料-MAb1專為免疫熒光設計，能夠在熒光顯微鏡下或用于流式細胞術和Western Blotting應用中觀察。免疫熒光中的抗體稀釋度通常低于免疫過氧化酶檢測系統中使用的稀釋度。

不提供：

用于免疫組化分析的標準試劑。

存儲：

a. 將Hypoxyprobe™-1固體存放在室溫下避光保存（也可在2-8攝氏度下避光存放）。

b. 將Pacific Blue染料-MAb存放在2-8攝氏度避光保存。切勿冷凍。

Hypoxyprobe™-1 Pacific Blue Kit檢測說明：

對正常或腫瘤組織缺氧的研究始于靜脈注射、腹腔注射或口服攝入Hypoxyprobe™-1（鹽酸匹莫噻唑）溶液，劑量為60 mg/kg體重。對于25克的大鼠，這相當于1.5 mg/大鼠。在小鼠中，最高劑量可達400 mg/kg而無可檢測的毒性或組織缺氧變化，但60 mg/kg在成本最小的情況下能夠提供良好的免疫染色。Hypoxyprobe™-1在鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可使用非常小的體積來施用Hypoxyprobe™-1。注射或攝入后，Hypoxyprobe™-1分布到所有組織，包括大腦，但僅在氧濃度低于14微摩爾的細胞中與含硫的蛋白質形成加合物——相當于37°C下的部分壓力pO2 = 10 mm Hg。除了腫瘤，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚中也存在pO2 = 10 mmHg或更低的細胞，這些正常組織會結合Hypoxyprobe™-1。Hypoxyprobe™-1在小鼠中的血漿半衰期約為25分鐘。相比之下， rats的血漿半衰期為45分鐘，犬為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的大鼠組織可在施用Hypoxyprobe™-1后60分鐘或更長時間進行采集。在采集時，組織內的Hypoxyprobe™-1將在組織缺氧時結合，但與60分鐘或更長實驗期間組織暴露的Hypoxyprobe™-1量相比，殘留的Hypoxyprobe™-1量非常小，因此任何由于殘留Hypoxyprobe™-1引起的非特異性結合都是不可檢測的。

除了動物研究外，Hypoxyprobe™試劑盒也可用于細胞培養。通常，細胞懸液在100至200微摩爾的Hypoxyprobe™-1存在下，在缺氧條件下孵育1到2小時。然后通過細胞離心收集細胞，固定并用太平洋藍MAb-1進行免疫染色。