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Bioss周周薦 | BCA 蛋白定量試劑盒

來源:北京博奧森生物技術有限公司   2024年10月22日 10:36  

工作原理

蛋白質定量是蛋白質研究的基礎工作之一。BCA (bicinchoninic acid)是理想的蛋白質定量方法,是當前比Lowry法更專用于檢測總蛋白質含量的產品。

BCA Protein Assay Kit?是一種用于蛋白質濃度測定的試劑盒,它基于BCA(Bicinchoninic Acid)法進行蛋白質定量分析。蛋白質在堿性條件下,將 Cu 2+還原為 Cu +,Cu + BCA 試劑形成紫顏色的絡合物,該復合物的顏色深淺與蛋白質濃度成正比,從而可以通過測量其在562nm處的吸光度來確定蛋白質的濃度。該方法快速靈敏、穩定可靠,不受絕大部分樣品中的化學物質的影響,對不同種類蛋白質檢測的變異系數非常小。BCA 蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)實現了蛋白濃度測定簡單、穩定性高、靈敏度高和兼容性高的特點。

產品介紹

C05-02001

 

產品優勢

準確靈敏,線性范圍廣BCA 試劑的蛋白質測定范圍是 10-2000μg/mL。

快速:45 分鐘內完成測定,比經典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。

經濟實用:在微孔板中進行測定,可大大節約樣品和試劑用量。

效果穩定:不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響,檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍。

 

使用說明
1. 配制工作液: 根據標準品和樣品數量,按體積比A : B (50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。BCA工作液室溫24小時內穩定。
2. 稀釋標準品:取10微升標準品用PBS稀釋至100ul(標準品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/ml。將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20ul加到96孔板的蛋白標準品孔中,加PBS補足到20ul。
3. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中,補加PBS到20ul。
4. 各孔加入200ul BCA工作液,37℃放置30分鐘。
5. 冷卻到室溫,用酶標儀562nm測定OD值,根據標準曲線計算出蛋白濃度。


注意事項
1. 在低溫條件或長期保存出現沉淀時,可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發現細菌污染則應丟棄。
2. 樣品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類會影響檢測結果,請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒;高濃度的去垢劑也影響實驗結果,可用TCA沉淀去除干擾物質。
3. 要得到更為精確的蛋白濃度結果,每個蛋白梯度和樣品均需做復孔, 每次均應做標準曲線。
4. 當試劑A和B混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失,工作液在密閉情況下可保存1周。
5. 需準備37℃水浴或溫箱、酶標儀或普通分光光度計,測定波長為540-595nm之間,562nm最佳。酶標儀需與96孔酶標板配套使用。使用分光光度計測定蛋白濃度時,試劑盒測定的樣品數量會因此而減少。使用溫箱孵育時,應注意防止因水粉蒸發影響檢測結果。

文獻引用精選



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