Hypoxyprobe™-F6試劑盒組件的詳細描述：

Hypoxyprobe™-F6 (CCI-103F)是一種六氟取代的2-硝基咪唑，具有六個磁等價的氟原子；分子量為337.2；水溶性為5.3毫摩爾，相當于1.8毫克/毫升。CCI-103F通常以10%二甲基亞砜/花生油混合物腹腔給藥（Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005）。在避光條件下儲存時，CCI-103F非常穩定。

CCI-103F在缺氧細胞中被還原激活。激活的中間體與蛋白質、肽和氨基酸中的巰基（硫醇）基團形成穩定的共價加合物。初級抗CCI-103F抗血清與這些加合物結合，允許通過免疫化學方法進行檢測。

抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6）與還原激活的CCI-103F的蛋白質加合物結合，并作為稀釋的兔抗血清供應，含有0.09%的疊氮鈉和1%的牛血清白蛋白作為穩定劑。感興趣的組織可以通過對福爾馬林固定的石蠟包埋切片或冷凍固定切片進行免疫組織化學研究，通過組織解離后的流式細胞術，或通過Western blotting進行研究。抗CCI-103F抗血清與CCI103F的蛋白質、肽和氨基酸加合物結合，但組織處理在準備免疫組織化學測定時會沖洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫組織化學檢測僅依賴于缺氧組織中CCI103F的蛋白質加合物。

在福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片上進行免疫過氧化物酶分析，涉及將組織切片與大約1:500稀釋的抗CCI-103F抗血清100微升孵育。然后應用色原性山羊抗兔二抗以顯示缺氧標記物加合物的分布。下面提供了一個詳細的免疫過氧化物酶協議作為一般指南，但強調Hypoxyprobe™技術是穩健的，鼓勵研究者自行修改。請參閱Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005及其中引用的關于冷凍切片的研究。

艾美捷Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)：

貨號：HPB-CCI-103F-250mg

應用：使用Hypoxyprobe™-F6試劑盒通過免疫化學檢測手段，包括免疫過氧化物酶、免疫熒光或流式細胞術，來測量組織和細胞中的缺氧。（參見Kleiter等人，Int. J. Radiation Oncol. Biol. Phys. 64(2): 592-602, 2006；Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005）。

數量：a. Hypoxyprobe™-F6試劑盒分別包含100、200或1000毫克的CCI-103F（Hypoxyprobe™-F6）。在小動物研究中通常使用的劑量是每公斤體重60毫克。

b. 每個試劑盒包含稀釋的抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6），其中含有0.09%的疊氮鈉和1%的牛血清白蛋白作為穩定劑。100毫克和200毫克的試劑盒各含有一個200微升的抗血清單位；1000毫克的試劑盒含有兩個200微升的抗血清單位。抗血清的最佳工作稀釋度需由研究者確定，但1/200至1/500的稀釋度在使用過氧化物酶標記的山羊抗兔二抗血清時能給出強烈的免疫過氧化物酶染色。

不提供：抗兔二抗試劑或其他免疫組織化學試劑（緩沖液、抗原修復劑等）。

儲存：a. 將Hypoxyprobe™-F6存放在室溫下的暗處（也可以存放在2-8攝氏度）。

b. 將兔抗血清（PAbF6）存放在2-8攝氏度。

Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)檢測說明：

嚙齒動物中標記物研究始于將CCI-103F溶解在10%二甲基亞砜/90%花生油中，通過靜脈或腹腔注射給藥（參見Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005），劑量為每公斤體重60毫克。六十至一百二十分鐘后，收獲感興趣的組織。CCI-103F的劑量為每公斤體重60毫克，在摩爾基礎上比Hypoxyprobe提供的另一種缺氧標記物匹莫尼達唑鹽酸鹽的劑量要低，但CCI-103F的血漿半衰期更長（t1/2 = 90分鐘，而匹莫尼達唑在小鼠中為25分鐘）。

注射后，Hypoxyprobe™標記物分布到所有組織，但只在那些氧濃度低于14微摩爾的細胞中與含硫蛋白質、肽和氨基酸形成加合物——相當于在37攝氏度下的部分壓力pO2 = 10毫米汞柱。正常的組織，如肝臟、腎臟和皮膚，包含在pO2為10毫米汞柱或以下的細胞，這些組織將結合Hypoxyprobe™標記物。收獲時組織中未結合的Hypoxyprobe™標記物將在解剖組織缺氧時被激活并結合。然而，與組織在典型實驗期間暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe™標記物濃度非常小，因此在組織收獲時由于殘留的Hypoxyprobe™標記物引起的任何非特異性結合都是不可檢測的。

圖。比較CCI-103F結合（F6，右圖）與匹莫尼達唑結合（Pimo，左圖）在福爾馬林固定的石蠟包埋犬腫瘤活檢組織切片中的結合情況。免疫過氧化物酶數據顯示，F6結合與匹莫尼達唑的結合非常相似。用于F6和匹莫尼達唑加合物的兔抗血清不發生交叉反應。這允許獨立測量兩個標記物的結合（參見Kleiter等人，Int. J. Radiation Oncol. Biol. Phys. 64(2): 592-602, 2006）。

福爾馬林固定的石蠟包埋組織中CCI-103F結合的免疫過氧化物酶分析的建議方案。

Kleiter等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 64: 592-602, 2006。

Hypoxyprobe™技術是穩健的，鼓勵研究者自行進行修改。